Ocorrência de vibrio parahaemolyticus em moluscos bivalves produzidos em Santa Catarina e desenvolvimento de método para quantificação por PCR em tempo real

Abstract

Vibrio parahaemolyticus é um patógeno veiculado por alimento e sua infecção humana é regularmente associada com o consumo de frutos do mar crus ou mal cozidos e água contaminada. Esta pesquisa teve como objetivo identificar e quantificar Vibrio parahaemolyticus em ostras frescas (Crassostrea gigas), mexilhões (Perna perna) e água do mar provenientes de diferentes regiões de cultivo de moluscos bivalves no litoral de Santa Catarina, Brasil e otimização de um ensaio rápido de qPCR utilizando tecnologia de sondas TaqMan MGB, visando o gene da hemolisina termolábil (tl) de V. parahaemolyticus para a detecção e quantificação desta bactéria a partir de frutos do mar e amostras ambientais. As amostras foram coletadas entre outubro de 2012 e Dezembro de 2013. Foram coletadas 130 amostras de ostras (Crassostrea gigas), 215 amostras de mexilhões (Perna perna) e 222 amostras de água do mar. A ocorrência de V. parahaemolyticus em ostras e mexilhões foi baixa, 10,76% e 11,62% das amostras analisadas. Maior incidência de V. parahaemolyticus foram observados na água do mar, 18,%. A densidade de V. parahaemolyticus no verão (dezembro a março) foi significativamente maior do que nas outras 3 estações do ano (P <0,01). O ensaio qPCR e os iniciadores utilizados são altamente específicos, quando testado contra outras bactérias. O ensaio também é altamente sensível, e, é capaz de detectar V. parahaemolyticus com altos valores de coeficiente em concentrações tão baixas como 10 2 cópias / reacção de soluções puras de ADN genômico e 30 células / ml em suspensão de células diluída em série e adicionadas em amostras de tecido de ostras e mexilhões. Recomendamos que medidas de controle devem ser consideradas, incluindo o estabelecimento de uma vigilância intensiva e contínua de V. parahaemolyticus potencialmente patogênicos em todas as áreas de cultivo de moluscos bivalves, avaliação dos parâmetros ambientais, bem como a avaliação do risco para a saúde humana associado a ao consumo desses moluscos que é específica de cada região.<br>

Abstract : Vibrio parahaemolyticus is a food borne pathogen and their human infection is regularly associated with the consumption of raw or undercooked seafood and contaminated water supplies. This research aimed to identify and quantify Vibrio parahaemolyticus in fresh oysters (Crassostrea gigas), mussels (Perna perna) and seawater coming from different regions of cultivation of bivalve shellfishes in the seacoast of Santa Catarina, Brazil and the otimization of a rapid qPCR assay using TaqMan MGB probe technology, targeting the thermo labile (tl) gene of V. parahaemolyticus for the detection and enumeration of this bacterium from seafood and environmental samples. Samples were collected between October 2012 and December 2013 and there were collected 130 oysters samples (Crassostrea gigas), 215 mussels samples (Perna perna) and 222 seawater. The occurrence of V. parahaemolyticus in oysters and mussels was low, 10,76% and 11,62% of samples tested. Higher incidences of V. parahaemolyticus were observed in seawater, 18,%. The density of V. parahaemolyticus in summer (December to March) was significantly greater than those in the other 3 seasons (P < 0.01). The occurrence of pathogenic V. parahaemolyticus in oyster, mussels and seawater was very low (<10%). The qPCR assay and the primers used are highly specific, and only generated the desired amplicons with V. parahaemolyticus DNA samples against other bacteria. The assay is also highly sensitive, and, is able to detect V. parahaemolyticus with high coefficient values in concentrations as low as 102 copies/reaction for pure genomic DNA solutions and 30 cells/ml in serially diluted cell suspension and spiked samples. We recommend that control measures should be considered, including the establishment of an intensive and continuous monitoring of potentially pathogenic V. parahaemolyticus from all oyster-growing areas, the environmental parameters, and the assessment of the region-specific human health risk due to consumption of oyster.