Estratégias de micropropagação de calibrachoa sellowiana (sendtn.) wijsman e Rosmarinus officinalis L.

Abstract

A micropropagação de plantas é uma estratégia, que se vem ao encontro das necessidades dessas duas espécies aqui apresentadas o Rosmarinus officinalis e Calibrachoa sellowiana ambas com potencial econômico a ser explorado. O Alecrim (R. officinalis) planta de origem do Mediterrâneo, possui características medicinais, podendo ser amplamente utilizado na indústria de cosméticos e medicamentos. A Petúnia (C. sellowiana) com seus atributos ornamentais, com valor de conservação e pioneira na recuperação de áreas degradadas e, por se tratar de uma espécie nativa dos campos sulinos, do Bioma Mata Atlântica tem um alto valor ecológico. Além disto, esta duas espécies possuem características para ser adotada como fonte de renda alternativa para agricultores. No presente trabalho segmentos nodais e apicais foram extraídos de plantas matrizes de Rosmarinus officinalis e de Calibrachoa sellowiana, foram utilizados em diferentes protocolos para a micropropagação através do cultivo em meio de cultura com diferentes tipos e concentrações de fitorreguladores, durante a indução, regeneração e alongamento de brotos. Para a introdução in vitro de Rosmarinus officinalis foram testados 11 tratamentos: 1) MSB isento de fitorreguladores; 2) ácido naftalenoacético - ANA (1 μM); 3) ANA (2 μM); 4) a combinados de ANA (1 μM) com Benzilaminopurina - BAP (1 μM); 5) ANA (1 μM) com BAP (4 μM); 6) ANA (2 μM) com BAP (1 μM); 7) ANA (2 μM) com BAP (2 μM); 8) ANA (2 μM) com BAP (4 μM); 9) BAP (1 μM); 10) BAP (2 μM) e; 11) BAP (4 μM). Para promover a proliferação e a regeneração múltiplas de brotos, os calos e as brotações, foram repicados em três diferentes meios de cultura: 1) ANA (2 μM) + BAP (4 μM); 2) MS + ANA (0,1 μM) + BAP (1 μM) e; 3) MS isento de fitorreguladores. Em R. officinalis observou-se que mais de 43,6% dos explantes apresentaram um tipo de contaminação e 30 % destes revelaram a presença de oxidação e a formação de calo e brotos foi de 56,4%, após 5 semanas de cultivo. A permanência de contaminações com bactérias endógenas evidencia a necessidade de uso de antibióticos no meio de cultivo. Além disto, a alta porcentagem de oxidação e necrose das culturas sugere o uso de antioxidantes durantes os subcultivos. Portanto uma das possíveis estratégias para a micropropagação do alecrim é pela via de organogênese direta, pela ocorrência de regeneração de brotos diretamente dos explantes e pela via indireta, com a indução de calo seguida da regeneração de brotos. Em C. sellowiana, a indução e estabelecimento in vitro das culturas foi conduzida em seis tratamentos, com a suplementação ao meio de cultura básico MSB com diferentes combinações de ácido naftalenoacético - ANA (0 e 0,1 μM) combinados com Benzilaminopurina - BAP (0; 0,5 e 1,0 μM). Regeneração e Multiplicação de Brotos. Brotações e culturas nodulares induzidas e estabelecidas in vitro, foram repicadas para promover a proliferação e a regeneração de brotações múltiplas, em dois diferentes meios de cultura básico MSB suplementado com a combinações dos fitorreguladores: 1) ANA (0,1 μM) e BAP (0,5 μM) e; 2) ANA (0,1 μM) e BAP (1,0 μM). Para a regeneração e o alongamento, os brotos foram repicados para frascos tipo conserva (340 ml) em meio de cultura MSB e isento de fitorreguladores. Brotações com 3-5 cm de altura foram retiradas das folhas para evitar a desidratação e imersa em solução de Ácido Indolilbutírico – AIB (50 ppm) para a indução de enraizamento e transferidas para a substratos para promover a aclimatização. O uso do meio de cultura MSB suplementado com ANA (0,1 μM) mais BAP (1,0 μM) promoveu a alta produção de brotos, e o surgimento de culturas do tipo nodular, que posteriormente regeneram em brotações múltiplas. As brotações e estas culturas do tipo nódulos induzidas e estabelecidas in vitro, quando subcultivadas com ANA (0,1 μM) mais BAP (1,0 μM) promoveram uma alta regeneração de brotos. Para a altura (cm) das plantas, as médias mais elevadas foram obtidas nos tratamentos contendo ANA (0,1 μM) e em MS sem a suplementação de fitorreguladores. Enquanto que, a suplementação ao MSB com ANA (0,1 μM) em combinação com BAP resultou em média maior e significativo número médio e micro brotos por explantes. Portanto, a estratégia para a micropropagação da C. sellowiana se caracteriza pelo modelo da organogênese via formação de nódulos como às culturas nodulares.

The micropropagation of plants is a strategy that meets the needs of both species presented here the Rosmarinus officinalis and Calibrachoa sellowiana both with economic potential to be exploited. The Rosemary (R. officinalis) Mediterranean plant origin, has medicinal properties, and can be widely used in the cosmetic and pharmaceutical industry. Petunia (C. sellowiana) with their ornamental attributes, with conservation and pioneering value in the recovery of degraded areas and, because it is a native species of southern fields, the Atlantic Forest biome has a high ecological value. In addition, these two species have characteristics to be adopted as alternative source of income for farmers. In this study nodal segments and apical were taken from mother plants of Rosmarinus officinalis and sellowiana Calibrachoa, were used in different protocols for micropropagation through the culture in culture medium with different types and concentrations of growth regulators, during induction, regeneration and elongation sprouts. For in vitro introduction of Rosmarinus officinalis were tested 11 treatments: 1) MSB free of growth regulators; 2) naphthaleneacetic acid - ANA (1 mM); 3) ANA (2 mM); 4) the combined ANA (1 mM) with Benzylaminopurine - BAP (1 mM); 5) ANA (1 mM) with BAP (4 mM); 6) ANA (2 uM) with BAP (1 mM); 7) ANA (2 uM) with BAP (2 mM); 8) ANA (2 uM) with BAP (4 mM); 9) BAP (1 mM); 10) BAP (2 mM) and; 11) BAP (4 mM). To promote the proliferation and multiple shoot regeneration, callus and shoots were transferred in three different culture media: 1) ANA (2 mM) + BAP (4 mM); 2) MS + NAA (0.1 mM) + BAP (1 mM) and; 3) MS free of growth regulators. In R. officinalis noted that more than 43.6% of the explants had a type of contamination, and 30% of them showed the presence of oxidation and the formation of callus and shoots was 56.4%, after 5 weeks of cultivation. The permanence of contamination with endogenous bacteria highlights the need for antibiotics in the culture medium. Furthermore, the high percentage of oxidation and necrosis of the cultures suggests the use of antioxidants Durantes the subcultures. So one of the possible strategies for the rosemary micropropagation is via direct organogenesis, the occurrence of shoot regeneration directly from explants and by indirect means, with the induction of callus regeneration then shoots. C. sellowiana, induction and in vitro establishment of the cultures were conducted in six treatments with the supplementation MSB basic culture medium with different combinations of naphthaleneacetic acid - NAA (0 and 0.1 mM) combined with benzylaminopurine - BAP (0, 0.5 and 1.0 mM). Regeneration and multiplication of shoots. Shoots and established in vitro and induced nodule culture, were transplanted to promote proliferation and regeneration of multiple shoots in two basic different ways of MSB culture supplemented with combinations of plant growth regulators: 1) NAA (0.1 mM) and BAP (0.5 mM) and; 2) ANA (0.1 mM) and BAP (1.0 mM). For regeneration and stretching, the shoots were transferred to preserve type bottles (340 ml) in the middle of MSB culture and free of growth regulators. Shoots with 3-5 cm were taken from the sheets to prevent dehydration and immersed in acid solution indole butyiric - IBA (50 ppm) to induce rooting and transfer to substrates to promote acclimatization. The use of MSB culture medium supplemented with NAA (0.1 mM) more BAP (1.0 mM) promoted the high production of shoots, and the emergence of the nodular type cultures, which subsequently regenerate multiple shoots. Shoots and these cultures type nodules induced and established in vitro, when subcultured with ANA (0.1 mM) more BAP (1.0 mM) promoted a high shoot regeneration. For height (cm) of the plants, the highest means were obtained from treatments with NAA (0.1 mM) and MS without supplementation of growth regulators. Whereas supplementation with the MSB NAA (0.1 mM) in combination with BAP resulted in higher mean and median and the mean micro shoots per explants. Therefore, the strategy for micropropagation of C. sellowiana is characterized by the model of organogenesis via lumps as the nodule culture