Avaliação da atividade anti-glioma do monepantel

Abstract

O Glioblastoma é um tumor cerebral maligno com alta letalidade, cujo tratamento padrão inclui ressecção cirúrgica seguida de radioterapia e quimioterapia com temozolamida. Apesar de serem amplamente utilizados, esses tratamentos frequentemente apresentam resultados insatisfatórios em termos de eficácia e sobrevida a longo prazo. Assim, se torna fundamental desenvolver alternativas para inibir a progressão do glioblastoma. A autofagia é um processo necessário para a homeostase tecidual e em tumores pode representar uma forma de sobrevivência celular. Porém, quando induzida em excesso, a autofagia pode ocasionar a morte celular. Portanto, moléculas capazes de induzir a autofagia podem ser uma estratégia para a supressão tumoral, especialmente em células resistentes à indução de apoptose. Monepantel é um vermífugo desenvolvido pela NovartisÒ que mostrou alta atividade antitumoral em câncer de ovário, através da indução de autofagia. Dentro deste contexto, nosso estudo tem como objetivo caracterizar uma atividade antiglioma in vitro do Monepantel, avaliando a capacidade de indução de morte celular, processo de autofagia, migração celular e vias de sinalização associadas a estes processos (MAPKs, Akt/mTORC1). Para isso, culturas de linhagens tumorais de glioma de roedores (C6) e de humanos (U87MG) foram incubadas frente a diversas concentrações de Monepantel (1- 50 µM) e por períodos variados (6-48h). Diversos parâmetros foram avaliados, incluindo: viabilidade celular, através do método do MTT; autofagia, através da avaliação de LC3II por western blot e microscopia com marcação por laranja de acridina; migração celular, através do método de ?Scratch?; proteínas de sinalização celular através de western blot. Os principais resultados mostraram que o Monepantel promoveu diminuição na viabilidade, migração celular e proliferação nas concentrações mais elevadas, bem como promoveu autofagia, avaliada pela formação das organelas vesiculares ácidas e aumento dos níveis de LC3-II. Na avaliação das vias de sinalização AKT/mTORC1/p70, ERK1/2 e p38MAPK, os resultados mostraram efeito estatisticamente significativo na diminuição da fosforilação de ERK2. Em conjunto os dados indicam que Monepantel apresentou atividade antitumoral sobre as células de glioma C6 e sugerem a necessidade de aprofundar a avaliação das vias de sinalização, que podem estar envolvidas na modulação da autofagia, viabilidade e migração celular.

Abstract: Glioblastoma is a malignant brain tumor with high lethality, for which standard treatment includes surgical resection followed by radiotherapy and chemotherapy with temozolomide. Despite their widespread use, these treatments often yield unsatisfactory results regarding efficacy and long-term survival. Therefore, it is crucial to develop alternatives to inhibit glioblastoma progression. Autophagy is a process necessary for tissue homeostasis and is associated with cellular survival mechanism in tumors. However, excessive autophagy can lead to cell death. Thus, molecules capable to induce autophagy could be a strategy for tumor suppression, especially in cells resistant to apoptosis induction. Monepantel, an anthelmintic developed by Novartis®, has shown significant antitumor activity in ovarian cancer through the induction of autophagy. In this context, our study aims to characterize the antiglioma activity of Monepantel in vitro by evaluating its effects on cell death induction, autophagy, cell migration and signaling pathways (MAPKs, Akt/mTORC1) associated with these processes. For this purpose, rodent (C6) and human (U87MG) glioma cell lines were incubated with various concentrations of Monepantel (1-50 µM) for different time periods (6-48 hours). Parameters assessed included: cell viability using the MTT assay; autophagy through LC3-II evaluation by western blot and acridine orange staining microscopy; cell migration using the Scratch assay; and signaling proteins by western blot. The main results showed that Monepantel reduced cell viability, migration and proliferation at higher concentrations and induced autophagy, as evidenced by the formation of acidic vesicular organelles and increased LC3-II levels. We also evaluated AKT/mTORC1/p70, ERK1/2 and p38MAPK signaling pathways, and the results demonstrated a statistically significant reduction in ERK2 phosphorylation. In summary, the data indicate that Monepantel exhibits antitumor activity against C6 glioma cells and suggest a need for further investigation of signaling pathways modulating autophagy, cell viability, migration and proliferation.