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Abstract:
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Cronobacter sakazakii é um patógeno oportunista emergente de origem alimentar, preocupante
pela sua alta resistência a secagem, e associação a doenças graves e potencialmente fatais em
recém-nascidos. Ao longo dos anos a fórmula infantil em pó vêm sendo reconhecida como
possível fonte de transmissão do patógeno Cronobacter sakazakii, entretanto outros alimentos,
como cereais infantis também podem se tornar um veículo de transmissão. Este trabalho tem
como objetivo determinar as condições de PCR e qPCR para detecção de Cronobacter e avaliar
a presença de C. sakazakii por PCR e qPCR em fórmula infantil e em mingau à base de milho
inoculados com o patógeno. Estes alimentos inoculados com Cronobacter sakazakii foram
mantidos a distintas temperaturas (4, 25 e 37°C) por 24 e 48 h. A análise de PCR obtive um
limite de detecção de 5 log cópias de DNA/reação. Não foi detectado o produto da PCR em
todas as amostras controles (não inoculadas), e nas amostras inoculadas logo após a inoculação
(tempo zero) com Cronobacter a 3 log UFC/mL, nas amostras inoculadas e armazenadas a 4°C
em ambos os alimentos, assim como não foi detectado nas amostras de mingau inoculadas e
mantidas a 25°C por 24 horas. Porém o produto da PCR foi detectado nas amostras inoculadas
mantidas a 25°C no período de incubação de 48 horas e a 37°C nos períodos de incubação de
24 e 48 horas. E em relação a fórmula infantil, a presença de Cronobacter por PCR foi detectada
nas amostras inoculadas após 24 e 48 horas de incubação a 25°C e 37°C. Em relação a análise
de qPCR, o limite de detecção foi de 2 log cópias de DNA/reação, e distintos limites de detecção
para as amostras, sendo 4 log cópias DNA/mL de fórmula infantil e 5 log cópias DNA/mL de
mingau a base de milho. Após incubação a 4°C, as amostras inoculadas de fórmula infantil
apresentaram contagens de 3,97, 3,76 e 4,05 log número de cópias DNA/mL em 0, 24 e 48
horas, respectivamente. No mingau não houve detecção da amplificação do fragmento alvo por
qPCR. Após incubação a 25°C, as amostras inoculadas de fórmula infantil apresentaram
contagens de 7,66 e 7,81 log número de cópias/mL em 24 e 48 horas, respectivamente. Para as
amostras inoculadas e mantidas a 25°C de mingau, as contagens foram 7,01 e 7,55 log número
de cópias DNA/mL após 24 e 48 horas. Após incubação a 37°C, as amostras inoculadas de
fórmula infantil apresentaram contagens de 6,09 e 7,75 log número de cópias DNA/mL em 24
e 48 horas, respectivamente. Para as amostras de mingau inoculadas e mantidas a 37°C, as
contagens foram de 8,58 e 8,09 log número de cópias DNA/mL em 24 e 48 horas. s. As
condições otimizadas deste estudo mostraram-se eficazes na detecção do patógeno,
principalmente a análise de qPCR. A detecção de Cronobacter em alimentos infantis é
extremamente importante para proteger os indivíduos vulneráveis, como os recém-nascidos,
contra potenciais riscos microbiológicos. |
