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Abstract:
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Hodiernamente são conhecidas as funções endógenas desempenhadas pelo monóxido de carbono (CO). Em concentrações baixas, o CO possui propriedades terapêuticas e pode ser empregado para o tratamento de várias patologias. Todavia, em razão de sua alta afinidade pela hemoglobina, o CO pode ser tóxico e, por isso, têm-se buscado opções para administrá-lo de maneira controlada. Do ponto de vista terapêutico, destacam-se as moléculas liberadoras de CO fotoativadas (fotoCORMs). O atual desafio está em otimizar a fotoliberação de CO em ambiente biológico. Estudos in vitro de fotoCORM com proteínas são alternativas de mimetizar as condições fisiológicas e compreender o impacto das fotoCORMs em um sistema biológico. À luz deste cenário, o trabalho desenvolvido propôs modificar, pós traducionalmente, a proteína tirosina fosfatase A de Mycobacterium tuberculosis com uma fotoCORM de manganês(I). O ligante heterocíclico nitrogenado N-(2-piridilmetil)-1,3-propanodiamina foi sintetizado e caracterizado por RMN, UV-Vis e IV. A partir deste ligante, foi sintetizada a fotoCORM, a qual foi caracterizada por IV, UV-vis, eletroquímica, ESI-MS e condutometria. A fotoCORM demonstrou ser estável na ausência de luz em meio orgânico e em meio tamponado, por 60 h, e a cinética de liberação de CO, pela aplicação de luz com comprimento de onda de 395 nm, foi de pseudo-primeira ordem. A proteína tirosina fosfatase A (PtpA) foi expressa em bactérias Escherichia Coli BL21(D3) e purificada por cromatografia de troca iônica, onde eluiu pura na fração de 100 e 200 mM de imidazol, com massa de 19.924 (±1) Da confirmada pelo ESI-MS. A conversão dos resíduos de cisteínas (Cys) da PtpA para deidroalanina (DHA) foi feita via eliminação-bis-alquilação e confirmou-se a reação pelo aparecimento do pico em 19.890 (±1) Da, referente a PtpA-DHA53. A ligação da fotoCORM na PtpA-DHA53, foi confirmada pelo aparecimento do pico em 20.192 (±2) Da e 20.154 (±2) Da na análise pelo ESI-MS. Ademais, a PtpA perdeu cerca de ⅓ de sua atividade específica após conversão dos resíduos de Cys para DHA e houve total inativação da PtpA após modificação com a fotoCORM. |
