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Abstract:
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Os Siglecs (sialic-acid-binding immunoglobulin-like lectins) são receptores expressos em diversas células do sistema imunológico que apresentam propriedades imunomodulatórias através da sua ligação com ácidos siálicos e a sua capacidade de recrutar fosfatases para inibir a sinalização celular, atuando como um regulador negativo das respostas inflamatórias. A neuraminidase é uma sialidase que cliva a interação ácido siálico-siglec e, assim como o LPS, induz ativação celular e causa uma resposta inflamatória desregulada. A resposta inflamatória desregulada é especialmente danosa em doenças como a sepse. Propusemos que o oseltamivir e o zanamivir, inibidores da neuraminidase viral na infecção por influenza A e B, poderiam ser capazes de inibir a ativação de monócitos (população CD66b-), regulando assim a resposta celular exacerbada. Para isso, primeiramente, caracterizamos a expressão de receptores siglecs em monócitos (população CD66b-), em que foi encontrada uma maior expressão de siglecs-3 (953) e -9 (MFI=2406) na membrana dessas células. A expressão de siglecs também foi testada com diferentes concentrações de LPS em siglec-3 (MFI Control = 1456, 0,01 μg / mL = 2628, 0,1 μg / mL = 2793, 1μg / mL = 3323), siglec-5 e siglec- 7. A expressão de Siglec-9 apresentou um perfil invertido com o aumento da concentração de LPS (MFI Control = 980, 0,01 μg / mL = 1732, 0,1 μg / mL = 1514, 1μg / mL = 1113). Os resultados do ensaio de tempo-resposta avaliando a expressão de siglec-5 e siglec-9 estimulados com LPS mostraram um aumento em ambos os siglecs (Siglec-5 MFI Control = 313 6h = 1123 Siglec-9 MFI control = 2801 6h = 6495). A avaliação da glicosilação após estímulo com LPS demonstrou diminuição dos ácidos ligados na conformação α2,3 (MFI Controle=1404, MFI LPS=595, MFI MAL-II=4944, MFI LPS+MAL-II=1583) e o tratamento com os inibidores de neuraminidase Oseltamivir e Zanamivir estimulados com LPS e Neuraminidase exógena recuperou níveis de ácido siálico parcialmente LPS (MFI controle=2095, MFI LPS=1322, MFI LPS+Zanamivir=2495. MFI controle=2095, MFI NEU=908, MFI NEU+Zanamivir=1839. MFI controle=2641, MFI NEU= 1731,MFI NEU+Oseltamivir=2145. |
