Estudo caso-controle do gene MTHFR (regiões 677 e 1298) em pacientes com Lúpus Eritematoso Sistêmico, em Santa Catarina - Brasil

Abstract

Introdução: Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES) é uma doença reumática inflamatória e crônica de origem autoimune. Possui a combinação de predisposição genética e ambiental que altera a expressão de genes reguladores principalmente do sistema imune. Por se tratar de uma doença complexa, vários genes estão envolvidos na sua ação. Nesse contexto genético, o papel dos genes que codificam moléculas importantes no metabolismo tem sido alvo de interesse pela importância desses processos no organismo e no desenvolvimento de doenças. Para o metabolismo, a MTHFR (5,10-Metilenetetrahidrofolato Redutase) é uma importante enzima que está envolvida em processos de metilação e síntese de DNA e de vias metabólicas do ácido fólico (vitamina B9). Possui polimorfismos de nucleotídeo único (SNP) em diversas partes do gene MTHFR, porém os mais importantes são na região C677T [rs1801133] e A1298C [rs1801131] que diminuem a atividade dessa enzima. Nos pacientes com LES, sabe-se que as células dos leucócitos mononucleares exibem várias alterações. Com isso, ocorre a produção de citocinas anormais, diminuição da função citotóxica e aumento da resposta humoral. Portanto, variações genéticas das enzimas da via folato, que atuam em conjunto para doação de metila na região reguladora do DNA podem causar o mau funcionamento dessas células. Vários estudos comprovam que uma super expressão anormal de citocinas, no qual ocorre um aumento de autoanticorpos, está relacionada a uma baixa metilação em regiões regulatórias do DNA em células T. Objetivo: Investigar a associação do SNP do gene MTHFR (C677T e A1298C) a genótipos de risco/proteção para o desenvolvimento da doença através de um estudo casocontrole em pacientes de Santa Catarina - Brasil. Resultados: a análise dos genótipos e das frequências alélicas por PCR-RFLP para a região C677T encontra-se em Equilíbrio de Hardy- Weinberg (EHW). Porém, para a região A1298C o grupo de casos está fora do equilíbrio (p= 0,0013) e grupo dos controles encontra-se em EHW. Não foi encontrada nenhuma associação significativa entre casos e controles quando calculado o odds-ratio considerando cada alelo e cada genótipo como fator de risco/proteção para o desenvolvimento de LES na região MTHFR 677. Porém, demonstrou-se que a presença do alelo A na região 1298 do gene MTHFR aumenta em 1,618 vezes a chance de desenvolver LES (OR = 1,618; 95% IC: 1,097 – 2,388; p = 0,014), sendo que o alelo C atua como fator de proteção (OR = 0,618; 95% IC: 0,419-0,912; p = 0,014). Análises de odds-ratio foram feitas para oito manifestações clínicas da doença (Artrite, Fotossensibilidade, Eritema malar, Úlcera oral, Nefrite, Anemia, Alterações neurológicas, Serosite). Sendo que duas manifestações foram associadas com a região A1298C a de Fotossensibilidade em que o alelo A atua como fator de risco (OR = 1,947; 95% IC: 1,026 – 3,701; p = 0,041) e o alelo C como fator de proteção (OR = 0,513; 95% IC: 0,270 – 0,975; p = 0,041) e Úlcera oral em que o alelo C atua como fator de risco (OR = 1,944; 95% IC: 1,073 – 3,528; p = 0,027) e o alelo A como fator de proteção (OR = 0,514; 95% IC: 0,283 – 0,932; p = 0,027). Conclusão: Os resultados mostram uma relação dos polimorfismos do gene MTHFR com LES para pacientes do Estado de Santa Catarina - Brasil para a região A1298C, tanto na comparação estatística de Caso-Controle quanto nas manifestações clínicas para fotossensibilidade e úlcera oral.

Introduction: Systemic lupus erythematosus (SLE) is an inflammatory and chronic rheumatic disease of autoimmune origin. It has the combination of genetic and environmental predisposition that alters the expression of metabolic regulatory genes. Because it is a complex disease, several genes are involved in its etiology. In this genetic context, the role of genes encoding important molecules in metabolism has been of interest in the importance of these processes in the body and in the development of diseases. For metabolism, MTHFR (5,10- Methylenetetrahydrofolate Reductase) is an important enzyme that is involved in the methylation and synthesis of DNA and metabolic pathways of folic acid (vitamin B9). It has single nucleotide polymorphisms (SNP) in several parts of the MTHFR gene, but the most important are in the C677T [rs1801133] and A1298C [rs1801131] regions that decrease the activity of this enzyme. In SLE patients, it is known that mononuclear leukocyte cells exhibit various aberrations. This leads to the production of abnormal cytokines, decreased cytotoxic function and increased humoral response. Therefore, genetic variations of the folate pathway enzymes that act together for methyl donation in the DNA regulatory region may cause malfunction of these cells. Several studies have shown that an abnormal cytokine superexpression, with increased autoantibodies production, is related to low methylation in regulatory regions of T-cell DNA. Objective: To investigate the association of SNPs in the MTHFR gene (C677T and A1298C) to genotypes of risk / protection for the development of systemic lupus erythematosus, through a case-control study in patients from Santa Catarina - Brazil. Results: analysis of genotypes and allele frequencies by PCR-RFLP for the C677T region showed a Hardy-Weinberg Equilibrium (HWE). However, for the A1298C region the control group is in HWE, but the case group is out of balance (p = 0.0013). No significant association was found between cases and controls and SLE when calculating the odds ratio considering each allele and each genotype as a risk / protective factor for the development of SLE in the MTHFR 677 region. However, the MTHFR 1298 region indicated that individuals with the A allele were more likely to develop the disease (OR = 1.68; 95% CI: 1.097-2.388; p = 0.014). Allele C acts as a protective factor (OR = 0.618, 95% CI: 0.419-0.912, p = 0.014). Odds ratios were also calculated for eight clinical manifestations of the disease (Arthritis, Photosensitivity, Eritema malar, Oral ulcer, Nephritis, Anemia, Neurological disorders, Serositis). In the A1298C region, two manifestations showed association: photosensitivity in which the A allele acts as a risk factor (OR = 1.947, 95% CI: 1.026 - 3.701, p = 0.041) and the C allele as a protection factor (OR = 0.513; 95% IC: 0.270 – 0.975; p = 0.041) and Oral ulcer in which the allele C was a risk factor OR = 1.944; 95% IC: 1.073 – 3.528; p = 0.027) and the A allele acts as a protection factor (OR = 0.514; 95% IC: 0.283 – 0.932; p = 0.027). Conclusion: The results indicate an association of the polymorphisms A1298C in the MTHFR gene with SLE in patients from the State of Santa Catarina - Brazil, as well as with the specific clinical manifestations photosensitivity and oral ulcers.