Influência da taxa de descongelação, da proporção de sêmen e da solução diluidora para diferentes crioprotetores nos parâmetros espermáticos do sêmen do suruvi (Steindachneridion scriptum) crioconservado.

Abstract

O presente estudo tem objetivo de contribuir com informações de relevância para elaboração de um protocolo de crioconservação para suruvi (Steindachneridon scriptum), que é uma espécie nativa, da Bacia do Prata e em risco de extinção (MMA, 2008). Foram avaliados diferentes fatores em duas etapas do experimento, onde a influência de duas soluções diluidoras e cinco taxas de descongelação nos parâmetros espermáticos do sêmen do suruvi. Foram testadas na primeira etapa os efeitos de três diferentes taxas de diluição sêmem: solução diluidora, e em uma segunda etapa foi testado o efeito de três crioproterores internos, distintos entre si. A indução a espermiação foi realizada de acordo com o protocolo de rotina. A coleta do sêmen em tubos de falcon foi feita por pressão abdominal. Foram formuladas soluções diluidoras, modificadas de Carolsfeld et al. (2003), utilizando diferentes combinações de crioprotetor externo e interno. Para o experimento 1 foram utilizadas duas soluções diluidoras, a solução um (S1), composta por DMSO, gema de ovo, glicose e água destilada, e a solução dois (S2), composta por metanol, leite em pó desnatado, glicose e água destilada. Uma parte de sêmen fresco foi misturada a quatro partes de solução diluidora. A mistura foi envasada e congelada em palhetas de 0,5ml. Foram utilizadas cinco velocidades (°C/min.) de descongelamento (VA=648,0; VB=828,7; VC=1146,6; VD=1845,0 e, VE=4440,0). Foi utilizado um delineamento experimental de arranjo fatorial, com três fatores (Peixe (n=3), solução diluidora (n=2) e velocidade de descongelamento (n=5)). A anális (µm/s), velocidade média de deslocamento (VAP) (µm/s) e velocidade em linha reta (VSL) (µm/s). No experimento 1 os valores médios obtidos para motilidade (MOT) apresentaram diferença significativa (p<0,05) apenas entre os níveis do fator taxas de descongelação, o sêmen descongelado a uma taxa de 828,7 °C/min. apresentou o maior valor médio de MOT 24,7±8,9%. Os valores médios de VMD e VLR foram diferentes (p<0,05) entre as soluções diluidoras, com médias para VMD de 33,88± 0,8 µm/s para o DMSO e 45,02±1,94 µm/s para o metanol, enquanto que a média da VLR foi de 31,51±0,81 µm/s para o DMSO e 42,56±1,95 µm/s com o metanol. A VCL foi entre os fatores testados, semelhante. No experimento 2 a MOT apresentou diferença significativa (p<0,05) entre os peixes. E a motilidade média das amostras crioconservadas com metanol foram mais altas em relação às demais soluções utilizadas. Já as velocidades espermáticas, VCL, VMD e VLR foram influenciadas significativamente (p<0,05) pelos crioprotetores utilizados, apresentando maiores valores para solução diluidora produzida à base de DMA.

This study has aimed to contribute relevant information to prepare a cryopreservation protocol for suruvi (Steindachneridon postscript), which is a native species, the La Plata Basin and at risk of extinction (MMA, 2008). They evaluated different factors in two stages of the experiment, where the influence of two solutions dilutive five thawing rates in sperm parameters of suruvi semen. in the first step they were tested the effects of three different dilution rates semen: diluting solution, and in a second step was tested the effect of three internal crioproterores, distinct from each other. The induction spermiation was performed according to the routine protocol. The semen collection in falcon tubes was made by abdominal pressure. Were formulated dilutive solutions, modified Carolsfeld et al. (2003), using different combinations of external and internal cryoprotectant. For experiment 1 were used two diluting solutions, one solution (S1) consisting of DMSO, egg yolk, glucose and distilled water, and the two solution (S2) comprising methanol, skimmed milk powder, glucose and water distilled. A had the highest average value of MOT 24.7 ± 8.9%. The average values of VMD and VLR were different (p <0.05) between the dilutive solutions, with averages for VMD 33.88 ± 0.8 um / s for DMSO and 45.02 ± 1.94 um / s for methanol, whereas the VLR average was 31.51 ± 0.81 um / s for DMSO and 42.56 ± 1.95 um / s with methanol. The VCL was among the tested similar factors. In experiment 2 MOT significant difference (p <0.05) between the fish. And the average motility of cryopreserved samples with methanol were higher compared to other solutions used. Already sperm speed, VCL, VMD and VLR were influenced significantly (p <0.05) by cryoprotectants used, with higher values for diluting solution produced DMA base.