Caracterização por microscopia de força atômica de camadas lipídicas imobilizadas em superfícies

Abstract

Neste trabalho foram preparados filmes lipídicos de DMPC (1,2-dimiristilfosfatidilcolina) em substratos de mica, silício hidrofóbico e silício hidrofílico, com a finalidade de sintetizar estruturas que mimetizem membranas biológicas. As técnicas empregadas na preparação dos filmes foram fusão de vesículas lipídicas, espalhamento de solução orgânica por centrifugação (#spin-coating#), e automontagem por evaporação de solvente (#casting#), sendo que somente a última foi realizada nos três tipos de substratos. Os solventes utilizados para dissolver os lipídios foram isopropanol e clorofórmio. A caracterização estrutural e morfológica dos filmes foi realizada por análise topográfica de imagens obtidas por microscopia de força atômica (AFM). As amostras com e sem hidratação por vapor de água foram investigadas em ambiente controlado por fluxo constante de gás nitrogênio (ex-situ). Também foram realizadas imagens com hidratação total dos filmes por completa imersão das amostras em solução fisiológica (in-situ). Superfícies com degraus da ordem de 5 nm, característicos de bicamadas lipídicas, foram observadas principalmente em substratos hidrofílicos, com a formação ou não de estruturas multilamelares. In this work it has been prepared lipid films of DMPC 1,2-dimyristoyl-snglycero-3-phosphocholine) were prepared on mica, hydrophobic silicon, and hydrophilic silicon substrates, with the purpose of fabricating structures that mimic the biological membranes. The techniques used for the preparation of the lipid layers were vesicle fusion, spin-coating and casting. The solvents used for the dissolution of the lipids were isopropanol and chloroform. The morphologic characterization of the deposits was performed by acquiring atomic force microscopy (AFM) images of the surfaces. The images of samples with and without hydration in water vapor were taken in a chamber with controlled atmosphere and constant flux of nitrogen gas. This measuring condition is named ex-situ. In-situ experiments were also carried out by imaging the lipid films immersed in a physiologic solution. As a general result, surfaces with step heights of 5 nm, typical of lipid bilayers, were observed on samples prepared on hydrophilic substrates, being observed also the formation of multilayer structures.