Método verde isento de solventes para triagem e quantificação de N-nitrosaminas em amostras sólidas por HS/SPME-GC/NPD: aplicação em comprimidos de losartana

Abstract

As N-nitrosaminas (NAs) são compostos carcinogênicos que podem estar presentes em produtos farmacêuticos, como a losartana potássica, a qual é consumida diariamente por pacientes para o controle da hipertensão. Este estudo propõe a análise direta de amostras sólidas de losartana potássica para a determinação de seis NAs, utilizando a microextração em fase sólida com headspace (HS/SPME) acoplada à cromatografia gasosa com detecção por nitrogênio-fósforo (GC/NPD), como método de triagem de baixo custo, aplicável a laboratórios de controle de qualidade. Considerando a análise direta de sólido, foi desenvolvido um material de referência da losartana potássica contendo as seis NAs (RM-LP-NA), e este material foi avaliado em termos de homogeneidade, estabilidade e teor para garantir a adequada presença dos analitos no sólido para os ensaios de otimização e validação do método analítico. A fibra de DVB/Car/PDMS foi selecionada para a extração dos analitos. Os parâmetros da HS/SPME foram otimizados para alcançar condições ideais de extração, incluindo a análise de 0,8 g de amostra com granulometria menor que 45 mesh, agitação da amostra sólida à 250 rpm, tempo de extração de 85 min e temperatura de extração de 45 °C. O método HS/SPME-GC/NPD foi validado, apresentando coeficientes de determinação superiores a 0,99 por meio de calibração por semelhança de matriz com diluição sólido-sólido do RM-LP-NA, limites de detecção variando de 0,0001 a 0,0157 mg kg?¹, recuperações entre 79,7 % e 122,0 %, e valores de precisão intra e inter-dia inferiores a 18,7 %. Os parâmetros de validação, como a boa seletividade e quantificação na faixa de µg kg?¹, demonstram a eficiência do método na identificação e quantificação desses compostos mutagênicos, em conformidade com as preocupações atuais das autoridades reguladoras farmacêuticas. A NDEA foi detectada em duas das treze amostras analisadas, sendo identificada e quantificada pelo método HS/SPME-GC/NPD, com confirmação pelo método HS/SPME-GC/MS. O caráter verde do método foi avaliado por meio do Analytical GREEnness calculator (AGREE), que confirmou sua conformidade com os princípios da Química Verde apresentando score de 0,64. Além disso, essa abordagem é aplicável a outras amostras sólidas, incluindo insumos farmacêuticos ativos puros e produtos farmacêuticos acabados.

Abstract: N-nitrosamines (NAs) are carcinogenic compounds that may be present in pharmaceutical products such as losartan potassium, which is consumed daily by patients for hypertension control. This study proposes the direct analysis of solid losartan potassium samples for the determination of six NAs, using headspace solid-phase microextraction (HS/SPME) coupled to gas chromatography with nitrogen?phosphorus detection (GC/NPD), as a low-cost screening method applicable to quality control laboratories. For the direct solid analysis, a reference material of losartan potassium containing the six NAs (RM-LP-NA) was developed and evaluated in terms of homogeneity, stability and content to ensure the appropriate presence of analytes in the solid matrix for method optimization and validation assays. The DVB/Car/PDMS fiber was selected for analyte extraction. HS/SPME parameters were optimized to achieve ideal extraction conditions, including the analysis of 0.8 g of sample with a particle size smaller than 45 mesh, agitation of the solid sample at 250 rpm, an extraction time of 85 min, and an extraction temperature of 45 °C. The HS/SPME-GC/NPD method was validated, yielding determination coefficients above 0.99 through matrix-matched calibration with solid?solid dilution of RM- LP-NA, limits of detection ranging from 0.0001 to 0.0157 mg kg?¹, recoveries between 79.7% and 122.0 %, and intra- and inter-day precision values below 18.7 %. Validation parameters, such as high selectivity and quantification within the µg kg?¹ range, demonstrate the efficiency of the method for the reliable identification and quantification of these mutagenic compounds, in line with current concerns of pharmaceutical regulatory authorities. NDEA was detected in two of the thirteen samples analyzed, being identified and quantified by the HS/SPME-GC/NPD method and confirmed by HS/SPME-GC/MS. The greenness of the method was assessed using the Analytical GREEnness calculator (AGREE), which confirmed its compliance with the principles of Green Chemistry, presenting a score of 0.64. Moreover, this approach is applicable to other solid samples, including pure active pharmaceutical ingredients and finished pharmaceutical products.