Validação intralaboratorial de método analítico para determinação de alcaloides pirrolizidínicos em amostras de plantas Senecio brasiliensis, pólen e mel utilizando cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrometria de massas

Abstract

Mel é um produto alimentício produzido pelas abelhas melíferas, e, a diversidade da ?ora brasileira, associada à grande extensão territorial e a diversidade climática, possibilita ao país um grande potencial apícola, com colheitas durante todo o ano. As plantas mais procuradas pelos apicultores de Santa Catarina para a produção de mel são as de vegetação de matas nativas e do gênero Senecio, que é constituído por mais de 3000 espécies de ampla distribuição mundial e destas, sabe-se que cerca de 30 espécies são comprovadamente tóxicas devido à presença de alcaloides pirrolizidínicos, que são conhecidos por causarem intoxicações em animais herbívoros levando a perdas consideráveis na pecuária, sendo também constatada ocorrência de intoxicações em seres humanos causadas pelo consumo direto ou indireto de produtos de origem animal contaminados por estas espécies. Neste trabalho foi desenvolvido um método rápido para análise simultânea de monocrotalina, intermidina, licopsamina, retrorsina, retrorsina-N-óxido, senecionina, senecionina-N-óxido e equimidina utilizando cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrometria de massas. O capitulo 2 se refere à validação intralaboratorial utilizando o protocolo de validação da 2002/CE/657 e manual da garantia da qualidade analítica do MAPA com um preparo de amostra simplificado aplicado em amostras comerciais de diferentes regiões do Brasil. Os parâmetros de desempenho analíticos de acordo com o protocolo adotados foram adequados para uso, em termos de seletividade, linearidade, precisão, exatidão, CCa, CCß, estabilidade e robustez. O método proposto possui preparo de amostra simples, rápido e eficiente e a aplicabilidade do método foi verificada em 92 amostras comerciais, mostrando bom desempenho analítico que o torna adequado para aplicação em laboratórios de alimentos para a análise de rotina. Das amostras analisadas 99,1% foram detectados alcalóides pirrolizidínicos. No capitulo 3, um planejamento fatorial do tipo Box-Behnken foi utilizado a fim de viabilizar um preparo de amostra ótimo e o método validado foi aplicado nas amostras de mel, pólen e plantas do gênero Senecio brasiliensis e de acordo com os resultados encontrados, foi evidenciado que as maiores concentrações encontradas no mel foram também encontradas nas amostras de pólen e planta da mesma região. Todas as amostras de mel analisadas estão acima dos valores recomendados de ingestão diária, assim como as amostras de pólen que chegam até 4000 vezes acima do valor recomendado.

Abstract : The diversity of Brazilian flora, associated to the great territorial extension and climatic diversity, allows the country a great apicultural potential, yielding harvests throughout the year. The plants most sought after by beekeepers in Santa Catarina for the production of honey are those of native vegetation and the genus Senecio, which is made up of more than 3000 species of worldwide distribution. About 30 Senecio species are proven to be toxic due to the presence of pyrrolizidine alkaloids, which are known to cause intoxication in herbivorous animals leading to considerable losses in livestock, and occurrence of intoxication in humans caused by the direct or indirect consumption of animal products contaminated by these compounds. In this work, a rapid method was developed for the simultaneous analysis of monocrotaline, intermidine, lyopsamine, retrorsin, retrorsin-N-oxide, senecionine, senecionine-N-oxide, and equimidine, using high performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry. Chapter 2 refers to the in-house validation using the protocols of Commission Decision 657/2002/CE and the Brazilian Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA) quality assurance manual. A simplified sample preparation was applied to commercial samples from different regions of Brazil. The analytical performance parameters were suitable for use in terms of selectivity, linearity, precision, accuracy, CCa, CCß, stability, and robustness. This simple, fast, and efficient sample preparation method was checked in 92 commercial samples, showing good analytical performance. It is suitable for routine analysis in food laboratories. Pyrrolizidine alkaloids were detected in 99.1% of the analyzed samples. In Chapter 3, a Box-Behnken-type factorial design was used in order to make an optimal sample preparation feasible and the validated method was applied to the samples of honey, pollen and plants of the genus Senecio brasiliensis. According to the results found, it has been evidenced that the highest concentrations found in honey were also found in pollen and plant samples from the same region. All analyzed honey samples were above the recommended values of daily intake, as well as pollen samples that surpassed in 4000 times the recommended value.