Criação e padronização de métodos para análises etológicas de Drosophila melanogaster

Abstract

Os estudos de comportamento e teste de fármacos em animais vertebrados têm sido alvo de críticas e de questionamentos no campo da ética e do bem estar animal apesar de sua utilidade na pesquisa biológica e biomédica. Já existem iniciativas para diminuir a quantidade ou substituir os vertebrados utilizados nessas pesquisas. O uso de Drosophila em várias áreas biológicas, incluindo estudos de aprendizagem e de memória, vem sendo cada vez mais legitimado, pois os mecanismos biológicos fundamentais são conservados entre drosofilídeos e Homo sapiens. Este estudo teve por objetivo descrever o comportamento de D. melanogaster frente a diferentes estímulos que poderão ser usados para padronizar o uso desse animal em pesquisas de neurociência. Realizaram-se três estudos-piloto com drosofilídeos selvagens machos e fêmeas acondicionados em recipientes contendo os meios: álcool, banana, melado ou todos os meios, e submetidos a testes de preferência alimentar e de estresse de imobilização. Todos os testes foram filmados para posterior análise. No estudo 1, o tempo de privação alimentar, ao qual os animais foram submetidos antes dos testes, e a placa de Petry utilizada para o teste de preferência não foram adequados. No estudo 2, catálogos comportamentais para os dois testes foram elaborados além da confecção de um labirinto em cruz para o teste de preferência. Os dados indicam que o tamanho do labirinto não foi adequado, visto que a maior parte das moscas passaram todo o tempo no centro do aparato e não exploraram os braços onde haviam alimentos palatáveis. No estudo 3, foram confeccionados um labirinto com dimensões menores, uma caixa para colocar os aparatos durante as filmagens e um aspirador entomológico, para diminuir as anestesias com CO2. Moscas controle e estressadas, e as suas proles foram testadas, sendo um indivíduo de cada sexo/meio/grupo. Observou-se que os braços do labirinto foram explorados com maior frequência, em comparação ao estudo 2. Dos oito progenitores submetidos ao estresse de imobilização, seis apresentaram aumento da imobilidade em pelo menos uma sessão após o estresse. Entre as proles, isso foi observado em sete dos oito animais testados. O aumento da imobilidade após exposições ao estresse de imobilização mostra que D. melanogaster pode ser uma espécie adequada em pesquisas que visem estudar comportamentos de anedonia.

Studies on behavior and drug testing in vertebrate animals have been criticized and questioned in the field of ethics and animal welfare, despite their usefulness in biological and biomedical research. There are initiatives that aim to decrease the quantity or replace the vertebrates used in these studies. The use of Drosophila in many biological fields, including learning and memory studies, has been increasingly legitimized, whereas many fundamental biological mechanisms are preserved between drosophilids and Homo sapiens. This study aim to describe the behavior of D. melanogaster front of different stimuli that may be used to standardize the use of this animal in neuroscience research. Three pilot studies were performed with wild male and female drosophilids placed in glasses containing the medias: alcohol, banana, molasses or all media, and submitted to tests of food preference and immobilization stress. All tests were filmed for posterior analysis. In the first study, the time of food deprivation the animals were submitted before the tests, and the Petry dish used in the preference test weren’t adequate. In the second study behavioral catalogs were developed to the two tests and a plus maze to the preference test was created. The data showed that the size of the plus maze wasn’t satisfactory, because the animals spent more time in the center and didn’t explore the arms with food. In the third study, was used a plus maze with small size, a box to put the apparatus inside during the tests and an entomological aspirator to reduce the anesthesia with CO2. Controlled and stressed flies, and their offspring, were tested, being one individual of each sex/ medium/group. It was observed that the arms of plus maze were explored with more frequency than the study 2. Among the eight parental animals submitted to the immobilization stress, six increased the immobility at least one session after the stress. In between the offspring, it was observed in seven of eight tested animals. The increased immobility after the immobilization stress shows that D. melanogaster can be an appropriate specie to research that aim to study anhedonia behavioral.