Lafoensia pacari A. St. Hil: identificação de constituintes ativos e avaliação da atividade antidepressiva

Abstract

A espécie vegetal Lafoensia pacari A. St.-Hil., família Lythraceae, é uma planta medicinal muito utilizada nos estados de Goiás, Mato Grosso e Mato Grosso do Sul, sendo popularmente conhecida como pacari ou mangaba-brava. Dentre os vários propósitos medicinais desta planta, encontra-se o uso popular ?contra o desânimo?. Portanto, o nosso objetivo foi realizar o estudo fitoquímico do extrato bruto e frações obtidas biomonitorados pela atividade tipo antidepressiva. A análise fitoquímica apontou a presença de saponinas, taninos, esteroides, triterpenos e traços de flavonoides no extrato etanólico das cascas do caule de L. pacari (EEP) e na fração clorofórmica (FClor), a que melhor mimetizou o efeito do extrato bruto, são encontrados principalmente esteroides e triterpenos. Análises de RMN 13C, HMQC e CLAE-DAD da fração clorofórmica, permitiram identificar o esteroide ß-sitosterol e o triterpeno lupeol entre os principais constituintes desta fração. O pré-tratamento com EEP (100, 300 e 1000 mg/kg, v.o.) no teste do nado forçado (NF) sugere um efeito do tipo antidepressivo sem alteração na deambulação no campo aberto (CA). Após o fracionamento, a FClor foi a que melhor reteve a atividade biológica do extrato, sendo a dose de 70 mg/kg a mais efetiva no NF e no teste de suspensão pela cauda. Tanto o pré-tratamento com PCPA (100 mg/kg i.p., durante 4 dias ? inibidor da síntese de serotonina), quanto AMPT (100 mg/kg i.p., 4 h antes ? inibidor da síntese de catecolaminas) bloqueou o efeito da FClor, sugerindo o envolvimento do sistema serotoninérgico e catecolaminérgico na atividade observada. Dentre os compostos isolados, apenas o lupeol (40 mg/kg, v.o.) reduziu o tempo de imobilidade no NF sem alterar a deambulação dos animais no CA e as drogas PCPA e AMPT também bloquearam a atividade deste composto. Ao avaliar a atividade das isoformas MAO-A e MAO-B, na presença de FClor e de lupeol, não foi detectada qualquer inibição enzimática. Quanto à capacidade de aumentar o nível hipocampal do fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF), apenas a FClor se mostrou ativa no protocolo de tratamento estudado. Neste estudo não foi observado aumento na expressão (Western blotting) das proteínas CREB e pCREB, após os tratamentos com a FClor (70 mg/kg), o lupeol (40 mg/kg), o ß-sitosterol (40 mg/kg) e a imipramina (30 mg/kg). Assim, concluímos que o EEP, a fração rica em triterpenos e o triterpeno lupeol apresentaram efeito do tipo antidepressivo envolvendo as monoaminas endógenas, sem inibir diretamente a enzima MAO. Além disso, a FClor aumentou o nível hipocampal de BDNF, sem a participação da via de sinalização mediadapor CREB. Portanto, a L. pacari é uma espécie vegetal promissora na avaliação de fitoconstituintes com atividade antidepressiva.<br>

Abstract : The species Lafoensia pacari A. St.-Hil., Lythraceae Family, is a medicinal plant widely used in the states of Goiás, Mato Grosso and Mato Grosso do Sul, popularly known as ?pacari? or ?mangaba-brava?. Among the ethnophamalogycal uses was the use ?to raise the spirits?. Thus, in the present, our aim was to perform the phytochemical study of the crude extract and fractions bio-guided by the antidepressant-like activity. Phytochemical analysis showed the presence of saponins, tannins, steroids, triterpenes and flavonoids traces on the ethanol extract of of L. pacari stem bark (EEP) and in the chloroform fraction (FClor), the one that better mimicked the crude extract effects, are mostly found steroids and triterpenes. 13C NMR, HMQC and HPLC-DAD analysis of chloroform fraction have identified the steroid ß-sitosterol and the triterpene lupeol among the main constituents of this fraction. Pretreatment with EEP (100, 300 and 1000 mg/kg, p.o.) before the forced swimming test (NF) suggests an antidepressant-like effect with no change in ambulation in the open field (CA). After fractionation, the FClor was the one that best retained the biological activity of the crude extract and the dose of 70 mg/kg was the most effective in the NF and the tail suspension test. Pretreatment with PCPA (100 mg/kg i.p. for 4 days - a serotonin synthesis inhibitor) as well as AMPT (100 mg/kg i.p. 4 hours prior - a catecholamine synthesis inhibitor) blocked the FClor effect, suggesting the involvement of catecholaminergic and serotonergic system in the observed activity. Among the compounds isolated, only lupeol (40 mg/kg, p.o.) reduced the immobility time in the NF without changing the animal?s activity in CA. PCPA and AMPT also blocked the lupeol activity. In MAO-A and MAO-B isoforms activity assay in the presence of FClor and lupeol, no enzyme inhibition was detected. Regarding the ability to increase the hippocampal level of brain-derived neurotrophic factor (BDNF), only FClor was active in the studied treatment protocol. No increases were seen in CREB and pCREB proteins expression (Western blotting) after treatment with FClor (70 mg/kg), lupeol (40 mg/kg), ß-sitosterol (40 mg/kg) and imipramine (30 mg/kg). We have concluded that the EEP, the triterpenes fraction and lupeol showed an antidepressant-like effect involving endogenous monoamines, without directly inhibiting the MAO enzyme activity. Furthermore, FClor increased hippocampal BDNF levels, without involving of the signaling CREB-mediated pathway. Therefore, L. pacari is a promising plant in the study of phytochemicals with antidepressant activity.