Caracterização e expansão in vitro de células tronco epidermais derivadas da crista neural

Abstract

A implementação de tecnologias baseadas no uso de células tronco adultas requer a identificação de fontes prontamente disponíveis bem como o estabelecimento de metodologias de cultivo, expansão e diferenciação dessas células. Este trabalho teve como objetivo principal a caracterização e a expansão in vitro de células tronco epidermais da crista neural (EPI-NCSCs). Tais células residem no folículo piloso adulto e são remanescentes da crista neural - estrutura embrionária que origina o sistema nervoso periférico, melanócitos da pele, e musculatura lisa, ossos e cartilagens da região cefálica. Devido à acessibilidade e amplo potencial de diferenciação, as EPI-NCSCs são consideradas candidatas promissoras para futuras aplicações em Medicina Regenerativa e Bioengenharia Tecidual. Usando técnicas de cultivo de células em condição aderente e lançando mão das metodologias de imunofluorescência, RT-PCR, western blot e citometria de fluxo, demonstramos nesse trabalho que as EPI-NCSCs isoladas de vibrissas de camundongos adultos são caracterizadas pela expressão de genes característicos da CN (incluindo nestina, p75NTR, Pax3, Slug, Snail, Sox10 e Twist) e podem ser rotineiramente cultivadas e expandidas in vitro. Além disso, verificamos que a combinação dos fatores de crescimento EGF e FGF2 no meio de cultivo estimula a proliferação e direciona essas células a um estado de progenitor neuronal às expensas dos fenótipos glial e de músculo liso – o que foi evidenciado, respectivamente, pelo aumento na taxa de incorporação de BrdU e pela aquisição de morfologia semelhante à neuronal aliada a expressão de proteínas neurais. Em última análise, esses resultados evidenciam a possibilidade de obtenção de uma linhagem de células neuronais a partir de um órgão de fácil acesso como a pele, bem como as vantagens do uso dos fatores de crescimento EGF e FGF2 nesse processo. Tal linhagem poderia futuramente servir de base para tratamento de lesões do sistema nervoso, testes de drogas in vitro, e outras aplicações biotecnológicas.