|
Abstract:
|
A mastite bovina é uma inflamação da glândula mamária, considerada uma das enfermidades mais frequentes da pecuária leiteira, causa grande impacto pois prejudica a quantidade e a qualidade do leite. O tratamento convencional com antimicrobianos sintéticos é restrito em sistemas de produção orgânico e traz riscos já que seu uso favorece o surgimento de Resistência Antimicrobiana (RAM). Assim, a busca por novos antimicrobianos se justifica, incluindo a bioprospecção de plantas como macela (Achyrocline satureioides) e eucalipto (Eucalyptus citriodora) reconhecidas por ação antimicrobiana e anti-inflamatória. Sobre o potencial dos extratos vegetais como antimicrobianos naturais, a aplicação para mastite bovina, tem como desafio superar limitações como baixa solubilidade, instabilidade química e biodisponibilidade reduzida. Nesse contexto, se sugere o uso de Vesículas Extracelulares (VE) isoladas do leite como sistema de entrega de ativos, eficazes para proteger, transportar e direcionar os ativos dos extratos. Dentre as vantagens das VE, estão sua capacidade de atravessar barreiras biológicas e assim entregar os ativos diretamente à célula alvo. O presente projeto teve como objetivo padronizar uma metodologia de isolamento, purificação e carregamento de VEs extraídas do leite bovino com extrato poliherbal de macela (A.satureioides) e eucalipto (E. citriodora) visando desenvolver uma alternativa natural contra a mastite bovina. Foi utilizado leite bovino cru para isolamento e purificação submetido a pré-processamento (centrifugações a 2.000 × g e 3.000 × g), centrifugação diferencial (7.197 × g, 35.000 × g e 70.000 × g), filtração sequencial em membranas (0,65, 0,45 e 0,22 µm) e ultracentrifugação final a 100.000 × g por 3 h. As VEs obtidas foram caracterizadas através da determinação do teor proteico (método Bradford), caracterizadas quanto ao tamanho médio, potencial zeta e índice de polidispersão (PdI) por Espalhamento Dinâmico de Luz. O carregamento com o extrato foi feito por método de incubação passiva por 24 h e a eficiência de encapsulação dos compostos fenólicos e flavonoides totais determinada pelo método de ultrafiltração em dispositivo Amicon (100 kDa). A atividade antimicrobiana das VEs foi determinada pelo método de microdiluição em caldo através da determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) contra Staphylococcus aureus (ATCC 25923 e ATCC 33592 e isolados de leite mastítico). As VEs isoladas apresentaram tamanho médio de 100,35±12,18 nm, PdI de 0, 296±0,064 e Potencial Zeta de-14,59±3,17 e teor protéico de ~0,3 mg/mL, compatível com características de leite maduro. O carregamento passivo resultou na encapsulação de 74,68%±6,33% para fenólicos totais e 61,80%±13,50% para flavonoides totais. Sobre a atividade antimicrobiana das VEs carregadas com extrato, a CIM variou de 156 µg/mL a 312,5 µg/mL de extrato poliherbal. Os resultados mostraram que o protocolo utilizado de isolamento e carregamento de VEs é reprodutível, viável e eficaz com potencial para constituir alternativa sustentável aos antimicrobianos sintéticos usados no tratamento da mastite bovina, principalmente para uso em sistemas de produção orgânica de leite. |
