Preparação de DNA plasmidial codificante para IL-12 visando à imunoterapia do câncer com mRNA

Abstract

As atividades de iniciação científica foram inicialmente vinculadas ao projeto “Análise de Perfis Celulares e Interações no Microambiente da Medula Óssea: Interfaces entre Hematopoiese e Câncer de Mama”. O plano previa a caracterização de interações celulares em modelos do nicho medular e do câncer de mama. Entretanto, a detecção de micoplasma na linhagem MDA-MB-231, a perda do estoque de células endoteliais HUVEC-E4ORF1 por problemas de criopreservação e o atraso no fornecimento dos animais impediram a execução das principais etapas experimentais durante a vigência da bolsa. No período inicial, foram realizadas a manutenção e a repicagem das linhagens 4T1.2 e MDA-MB-231.Diante dessas intercorrências, as atividades foram redirecionadas para outro projeto do laboratório, voltado ao desenvolvimento de estratégias de imunomodulação antitumoral com RNA mensageiro (mRNA). O objetivo das atividades relatadas passou a ser a preparação e o processamento de DNA plasmidial codificante para interleucina-12 (IL-12), citocina capaz de estimular respostas imunes antitumorais, como etapa preparatória para a futura produção de mRNA. Foram realizadas revisão bibliográfica, transformação bacteriana, seleção e expansão de colônias em meio contendo canamicina, purificação plasmidial, dupla digestão enzimática, eletroforese em gel de agarose, excisão do fragmento de interesse, purificação e quantificação do DNA. Ao final, obteve-se DNA com razão de absorbância A260/A280 compatível com baixa contribuição de contaminantes proteicos. Conclui-se que as atividades possibilitaram a obtenção e a caracterização espectrofotométrica de DNA nas etapas iniciais do fluxo experimental e contribuíram para a formação em cultura celular e biologia molecular. A produção de mRNA por transcrição in vitro, seu processamento, purificação e encapsulamento em nanopartículas lipídicas, bem como a avaliação da expressão de IL-12 e dos efeitos biológicos da formulação, permanecem como perspectivas. O trabalho relaciona-se principalmente ao eixo “Tecnologia e inovação”, com aplicação potencial em saúde, ao integrar engenharia de ácidos nucleicos e sistemas de entrega para o desenvolvimento de estratégias experimentais de imunoterapia do câncer.