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Abstract:
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O cobre é um micromineral que atua como cofator catalítico em reações de oxirredução, sendo assim, tem influência direta no metabolismo celular, dado que é essencial na produção de energia, defesa antioxidante, integridade do tecido conjuntivo e demais processos celulares; entretanto, o seu excesso pode resultar em efeitos citotóxicos. A partir disso, se tornou necessário avaliar como a toxicidade do metal poderia impactar na morte e sobrevivência de linhagens de glioblastoma, consequentemente testando a sua capacidade antitumoral. Foram utilizadas células das linhagens GBM-1 e U-87 MG, que foram expostas ao CuSO4 nas concentrações de 0, 300 uM, 600 uM, 900 uM ou 1200 uM durante 24 horas. Após esse período, foi realizado o teste ELISA para medir a liberação de HMGB-1 em ambas as linhagens como parâmetro de morte celular por cuproptose. Além disso, foi realizada a imunofluorescência para a caspase-3 clivada, para que seja possível verificar se o tratamento é capaz de influenciar na ativação da apoptose. Ademais, também foi realizada a imunofluorescência para avaliar a expressão da CD133, relacionada à quimiorresistência e capacidade de autorrenovação no glioblastoma. Observou-se que na linhagem GBM-1 houve um aumento na liberação do HMGB-1 nas concentrações de 900 uM e 1200 uM de CuSO4, enquanto na U-87 MG não foram observadas alterações nas diferentes concentrações utilizadas. Em relação à apoptose, na GBM-1 não foram observadas alterações quando as células foram expostas a 600 uM de CuSO4, enquanto na U-87 MG houve um aumento no imunoconteúdo de caspase-3 clivada na concentração de 900 uM. Verificou-se ainda que na GBM-1 não houve alteração no conteúdo de CD133 na concentração testada (600 uM), já na U-87 MG se observou um aumento, nesta mesma concentração, mas sem alterações quando as células foram expostas a 900 uM de CuSO4. Dessa forma, é possível concluir que o excesso de cobre afeta de forma distinta as linhagens celulares utilizadas no presente estudo, onde na U-87 MG ocorre uma resposta prioritariamente via morte programada por apoptose e modulação transitória de CD133 como mecanismo compensatório à toxicidade do metal; enquanto na GBM-1 verificou-se a liberação de HMGB-1, que pode indicar a morte celular por cuproptose. |
