Estudo exploratório para determinação de amicacina em plasma humano por HPLC-DAD com derivatização por 1-fluoro-2,4-dinitrobenzeno

Abstract

A disseminação global de bactérias multirresistentes renovou o interesse clínico pelos aminoglicosídeos, como a amicacina, cujo uso requer monitoramento terapêutico de fármacos para minimizar os riscos de nefrotoxicidade e ototoxicidade. Este trabalho teve como objetivo explorar condições experimentais para a determinação de amicacina em plasma humano por cromatografia líquida de alta eficiência com detector de arranjo de diodos (HPLC-DAD) após derivatização com 1-fluoro-2,4-dinitrobenzeno (FDNB), visando subsidiar a futura implementação do monitoramento terapêutico desse aminoglicosídeo no Hospital Universitário da Universidade Federal de Santa Catarina (HU-UFSC). Por meio do método One-Factor-at-a-Time (OFAT), foram avaliados os efeitos de variáveis cromatográficas, incluindo a vazão da fase móvel, o pH da fase móvel A e a proporção de acetonitrila na fase móvel. Além disso, foram comparados os agentes precipitantes de proteínas acetonitrila, ácido tricloroacético e metanol. Para otimizar os parâmetros da derivatização, empregou-se a metodologia de superfície de resposta (RSM) baseada em um delineamento composto central (CCD) de cinco níveis, avaliando-se as concentrações de Tris e FDNB, o tempo e a temperatura de aquecimento. O aumento da vazão para 1,0 mL/min reduziu o alargamento do sinal interferente do FDNB, possibilitando a visualização do analito. A utilização de uma fase móvel composta por tampão acetato (pH 5,0) e acetonitrila na proporção de 55:45 (v/v) promoveu adequada separação cromatográfica, com tempo de retenção de 13,7 minutos. Na etapa de preparo, o metanol produziu a maior resposta analítica, mas produziu um precipitado friável. A análise de variância (ANOVA) demonstrou que a temperatura e as concentrações de FDNB e Tris exerceram efeitos lineares significativos sobre a área do pico cromatográfico. O modelo matemático explicou 61,48% da variabilidade dos dados. O tempo de aquecimento não apresentou efeito estatisticamente significativo, permitindo sua redução para 10 minutos. Ainda são necessários ajustes nas etapas de processamento da amostra e derivatização, além de inclusão de padrão interno, para posterior validação do método analítico.