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Abstract:
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O Programa Avaliação Externa da Qualidade da Rede Nacional de Biologia Molecular para Detecção de Chlamydia trachomatis e Neisseria gonorrhoeae (AEQ-CT/NG) é conduzido pelo LBMMS/UFSC e é resultado da parceria com o DATHI/SVSA/MS. Assim, o presente trabalho visou padronizar a carga de CT por meio do cultivo celular para dar continuidade a padronização dos painéis CT/NG iniciada em 2024. Para isso, foram realizadas diluições seriadas de culturas de cepas ATCC® de CT (Sorotipo H; Cepa: UW-43/Cx VR-879-ATCCⓇ), diretamente do cultivo celular em placa de 48 poços, testadas no sistema CFX96TM (Bio-Rad®), e de culturas em estoque, testadas nos sistemas CFX96TM (Bio-Rad®), GeneXpert CT/NG® (Cepheid®) e Cobas 5800® CT/NG (Roche®). Tais sistemas de qPCR automatizados permitiram verificar a relação do Cq com as diluições realizadas. Ainda, as células infectadas foram coradas para verificar a presença de inclusões em microscópio invertido. As amostras provenientes de culturas em estoque foram liofilizadas em PBS com 4% de albumina bovina, meio utilizado na AEQ CT/NG, e testadas nos sistemas após a reidratação. Foram preparadas amostras para testagem no dia 1, 21, 30 e 60 após a liofilização. No presente trabalho, foram analisados os resultados do primeiro dia, as amostras dos dias subsequentes serão testadas e analisados posteriormente. A partir dos experimentos realizados, foi possível estabelecer a cultura celular para cultivo de CT, observar inclusões nas células infectadas com solução pura da bactéria e realizar a manutenção do estoque de CT para a produção dos painéis. Obteve-se 10-3 e 10-6 como diluições seguras para a confecção de painéis da AEQ CT/NG a partir da análise dos valores de Cq e desvio padrão entre os sistemas. ABSTRACT The External Quality Assessment Program of the National Molecular Biology Network for the Detection of Chlamydia and Gonococcus (AEQ-CT/NG) is conducted by LBMMS/UFSC and is the result of a partnership with DATHI/SVSA/MS. Concerning that, the present work aimed to standardize the CT load with cell culture to continue the standardization of the CT/NG panels initiated in 2024. Therefore, serial dilutions of ATCC® CT (Serotype H; Strain: UW-43/Cx VR-879-ATCCⓇ) were performed directly from the cell culture in a 48-well plate, tested on the CFX96TM system (Bio-Rad®), and of stock cultures, tested on the CFX96TM system (Bio-Rad®), GeneXpert CT/NG® (Cepheid®), and Cobas 5800® CT/NG (Roche®) systems. The automated qPCR systems allow for the verification of the relationship between the Cq and the performed dilutions. Furthermore, the infected cells were stained to verify the presence of inclusions using an inverted microscope. The samples from stock cultures were lyophilized in PBS with 4% bovine albumin, the medium used in the AEQ-CT/NG, and tested after rehydration. Samples were prepared for testing on day 1, 21, 30, and 60 after lyophilization. In this research, only the results from the first day will be analyzed; the samples from the subsequent days will be tested and analyzed later on. Based on the experiments performed, it was possible to establish the cell culture for CT cultivation, observe inclusions in the infected cells with the pure bacterial solution, and perform the maintenance of the CT stock aiming the production of the panels. Dilutions of 10-3 and 10-6 were obtained as safe dilutions for the preparation of the AEQ-CT/NG panels, based on the analysis of Cq values and standard deviation among the systems. |
