Febre amarela: desenvolvimento e validação de ensaio molecular do tipo RT-LAMP e investigação dos vetores silvestres no estado de Santa Catarina, Brasil

Abstract

A febre amarela é uma arbovirose aguda, causada pelo vírus da febre amarela (YFV), um membro da família Flaviviridae. Trata-se de uma zoonose de elevada gravidade clínica que é transmitida por culicídeos. A doença permanece como uma ameaça significativa à saúde pública no Brasil, com impactos expressivos para populações humanas e de primatas não humanos (PNH). Esta tese teve como objetivo desenvolver e validar um ensaio molecular do tipo RT-LAMP para diagnóstico do YFV e investigar os potenciais vetores silvestres envolvidos em sua transmissão no estado de Santa Catarina (SC). No primeiro capítulo, foi padronizado e validado um protocolo de RT-LAMP em amostras de PNH, que demonstrou alta sensibilidade e especificidade, apresentando-se como alternativa viável e de baixo custo frente à RT-qPCR, com potencial aplicação em vigilância descentralizada. O segundo capítulo descreveu, pela primeira vez, a ocorrência de Haemagogus leucocelaenus no Sul de SC, ampliando o conhecimento sobre sua distribuição geográfica. Além disso, evidências quanto a variações morfológicas dentre os espécimes capturados de Hg. leucocelaenus foram relatadas. Diante disso, a tese traz sequências inéditas de DNA barcode da espécie para a região. No terceiro capítulo, foram analisadas mais de 4.300 fêmeas de culicídeos coletadas em municípios afetados pelo surto de febre amarela silvestre, identificando ao menos 32 espécies, incluindo Hg. leucocelaenus e Sabethes albiprivus. Este último, apresentou o primeiro registro de infecção natural pelo YFV no Sul do Brasil, com elevada taxa mínima de infecção, sugerindo seu papel como vetor secundário, enquanto Hg. leucocelaenus provavelmente atuou como vetor primário. Os resultados desta tese contribuem para o avanço do diagnóstico molecular, da entomologia médica e da vigilância epidemiológica, destacando a necessidade de fortalecimento da cobertura vacinal e da vigilância integrada em áreas de risco.

Abstract: Yellow fever is an acute arbovirus caused by the yellow fever virus (YFV), a member of the Flaviviridae family. It is a highly clinically severe zoonosis transmitted by mosquitoes. The disease remains a significant public health threat in Brazil, with significant impacts on human and nonhuman primate (NHP) populations. This thesis aimed to develop and validate a molecular RT-LAMP assay for diagnosing YFV and investigating potential wild vectors involved in its transmission in the state of Santa Catarina (SC). The first chapter standardized and validated an RT-LAMP protocol in NHP samples, demonstrating high sensitivity and specificity, presenting itself as a viable and low-cost alternative to RT-qPCR, with potential application in decentralized surveillance. The second chapter described, for the first time, the occurrence of Haemagogus leucocelaenus in southern Santa Catarina, expanding knowledge of its geographic distribution. Furthermore, evidence of morphological variations among captured Hg. leucocelaenus specimens was reported. Therefore, the thesis presents unprecedented DNA barcode sequences of the species for the region. In the third chapter, more than 4,300 female Culicidae collected in municipalities affected by the sylvatic yellow fever outbreak were analyzed, identifying at least 32 species, including Hg. leucocelaenus and Sabethes albiprivus. The latter presented the first record of natural YFV infection in southern Brazil, with a high minimum infection rate, suggesting its role as a secondary vector, while Hg. leucocelaenus likely acted as a primary vector. The results of this thesis contribute to the advancement of molecular diagnostics, medical entomology, and epidemiological surveillance, highlighting the need to strengthen vaccination coverage and integrated surveillance in risk areas.