Desenvolvimento e padronização de coloração e contagem diferencial de hemócitos da espécie de Phacoides pectinatus

Abstract

Os moluscos bivalves são animais invertebrados de grande relevância econômica, ambiental e para a saúde pública. Há uma diversidade de pesquisas sobre a imunidade e fisiologia dos bivalves, no entanto, há poucos estudos sobre os aspectos imunológicos da espécie de bivalve Phacoides pectinatus. Esta, por sua vez, possui um grande potencial como modelo biológico para estudos relacionados à imunologia inata e à ecologia, particularmente devido à simbiose que estabelece com uma linhagem de bactéria quimiossintetizante. Neste sentido, pesquisas sobre a caracterização de suas células de defesa, chamadas de hemócitos, podem servir como base para a compreensão do sistema imune destes animais. Os hemócitos são a primeira linha de defesa do sistema imunológico em invertebrados, mas apesar da sua significante função, ainda há dificultadades e falta de consenso sobre a sua classificação e caracterização. Estudos mostram que as populações de hemócitos variam de acordo com a espécie de bivalve. Uma variedade de abordagens técnicas (citoquímica, ultraestrutural, com o uso de anticorpos) têm sido utilizadas para classificar essas células incluindo a microscopia óptica, eletrônica de transmissão e a citometria de fluxo. A presente proposta tem como foco realizar a primeira padronização de metodologias hematológicas da espécie de Phacoides pectinatus, de modo que serão primeiramente testadas e adaptadas as metodologias padrões de contagem total (com câmara de Neubauer) e diferencial (colorações com Giemsa e Hemacolor/Sigma) de hemócitos, utilizando microscopia óptica. Por fim, serão desenvolvidas técnicas de contagem total e diferencial de hemócitos para esta espécie de bivalve utilizando a plataforma integrada (leitora, incubadora e sistema de imagem) Spark Cyto® (Tecan). Desta forma, espera-se, com a realização da presente proposta, desenvolver protocolos inovadores de contagem e caracterização de hemócitos com o uso da plataforma Spark Cyto® (Tecan), assim trazendo maior agilidade e confiabilidade nas análises hematológicas para esta e demais espécies de invertebrados aquáticos.