Análise de parâmetros relacionados à disfunção mitocondrial em uma linhagem de células de glioblastoma(U-87 MG) exposta ao excesso de cobre.

Abstract

O cobre é fundamental no metabolismo dos seres vivos; entretanto, o seu excesso pode resultar em efeitos citotóxicos. Os efeitos tóxicos do metal podem afetar principalmente a mitocôndria, pois esta organela é o principal local de armazenamento do cobre. A partir disso, surgiram pesquisas explorando como a toxicidade do elemento poderia possuir capacidade antitumoral. Dessa forma, visamos explorar se o excesso de cobre afeta a viabilidade celular e o metabolismo mitocondrial em células de linhagem de glioblastoma humano. Foram utilizadas células da linhagem U-87 MG, que foram expostas ao CuSO4 nas concentrações de 0, 300 uM, 600 uM, 900 uM e 1200 uM durante 24 ou 48 horas. A viabilidade celular foi analisada pelas técnicas do vermelho neutro (NR, de neutral red) e do MTT, e a análise dos complexos I e II da cadeia respiratória, para averiguar a atividade mitocondrial, foi analisada por espectrofotometria. A sonda JC-1 foi usada para análise do potencial de membrana mitocondrial. Em relação à viabilidade celular, no teste do MTT, observou-se uma diminuição da viabilidade a partir de 300 uM de CuSO4 após 24h de exposição; porém, na exposição por 48h só houve um decréscimo a partir de 600 uM. Pelo teste do NR, após exposição ao CuSO4 por 24h, houve uma diminuição da viabilidade celular a partir de 900 uM, enquanto em 48h este efeito foi observado a partir de 600 uM. Em relação à cadeia respiratória, observou-se que não houve alterações na atividade da enzima NADH desidrogenase (complexo I) após exposição às diferentes concentrações de CuSO4 por 24h. Já para a succinato desidrogenase (complexo II) foi possível observar uma redução em sua atividade na concentração de 1200 uM de CuSO4. Ainda, houve uma redução no potencial de membrana mitocondrial em 600 uM e 1200 uM de CuSO4. Portanto, foi possível concluir que existe uma redução na viabilidade celular após exposição ao CuSO4, tanto em 24h como em 48h, e que as alterações na função mitocondrial estão relacionadas à diminuição da sobrevida celular em células da linhagem de glioblastoma U-87 MG, já que o excesso de CuSO4 está ligado com a ativação de diferentes vias de morte celular.