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Abstract:
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O Trypanosoma cruzi, causador da doença de Chagas, compreende parasitos unicelulares que
possuem um único flagelo, aderido ao longo do corpo flagelar por meio da Zona de Adesão
Flagelar (FAZ). Ao longo do ciclo biológico, entre hospedeiros vertebrados e invertebrados, o
T. cruzi apresenta as diferentes formas biológicas: epimastigota, tripomastigota e amastigota.
O flagelo se apresenta aderido ao corpo celular nas três formas, sendo importante para a
morfologia, divisão celular e infectividade do parasito. Entre as proteínas supostamente
envolvidas na FAZ de T. cruzi estão a FLA e a FLABP. Sabe-se que estas proteínas interagem
por meio de suas porções extracelulares em Trypanosoma brucei, garantindo a adesão do
flagelo ao corpo celular. Também em T. brucei, estas proteínas são compostas por
peptídeo-sinal na região N-terminal, uma longa porção extracelular seguida de uma região
transmembrana e uma curta sequência intracelular na porção C-terminal. Em um estudo
anterior realizado por nosso grupo de pesquisa, foi observado que esses elementos proteicos
são conservados em T. cruzi. No entanto, Souza-Melo e colaboradores (2023) sugeriram que,
em uma cepa diferente de T. cruzi, as proteínas FLA e FLABP não possuem peptídeo-sinal,
mas sim uma região transmembrana N-terminal, sendo que a região transmembrana
C-terminal foi prevista apenas para a FLABP. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi
investigar os elementos canônicos das proteínas FLA e FLABP de T. cruzi e caracterizar
funcionalmente a FLABP, explorando sua topologia e papel na adesão flagelar. Para isso,
foram realizadas análises in silico das sequências codificantes para as proteínas FLA e
FLABP em Trypanosoma spp., utilizando as ferramentas de predição de topologia SignalP,
Phobius, TMHMM 2.0 e DeepTMHMM. Os resultados confirmaram a existência e a
conservação, dentro do gênero Trypanosoma, de domínios como peptídeo-sinal N-terminal, a
porção extracelular e a região transmembrana C-terminal seguida de uma curta porção
intracelular, corroborando estudos anteriores. No entanto, divergências entre os modelos de
predição ressaltam a importância de se utilizar múltiplas ferramentas e realizar uma análise
criteriosa dos dados para inferir a organização dos domínios proteicos. Para a produção de
antissoro anti-TcFLABP para experimentos futuros, foi realizada a expressão heteróloga de
um fragmento da FLABP em bactérias. Após purificação, o fragmento poderá ser utilizado na
produção do antissoro, como recurso para análises posteriores. |
