Avaliação do efeito do tempol sobre a resposta pressórica da noradrenalina durante o choque séptico: participação na S-nitrosilação

Abstract

A sepse é uma síndrome que acomete milhões de pessoas todos os anos, na qual ocorre uma resposta exagerada do organismo a uma infecção. O agravamento da sepse origina o choque séptico, caracterizado por hipotensão e hiporresponsividade vascular a agentes vasopressores. Estudos anteriores sugerem a participação da Snitrosilação proteica na manutenção da hipotensão em animais sépticos. A Snitrosilação geralmente resulta em perda da função de receptores e proteínas de sinalização, relacionados à resposta aos vasoconstritores. A utilização de agentes denitrosilantes parece ser uma opção plausível para reverter este problema. O tempol é um antioxidante cíclico e acreditamos que ele tenha ação denitrosilante. Neste trabalho foram utilizados camundongos C57BL/6j com a sepse induzida por ligadura com punção de ceco (CLP). Os animais foram divididos em três grupos: Controle, CLP e CLP + Tempol. Os dados hemodinâmicos dos animais foram avaliados após 10 h do procedimento cirúrgico, com os animais acordados. O grupo CLP + Tempol recebia o tempol intravenoso e após 2 h eram feitas as curvas de dose-resposta com noradrenalina. Então, os animais eram eutanasiados e as seguintes amostras colhidas: aorta, coração, fígado e sangue. A partir destas amostras foram realizadas análises, como a nitrosilação total, a nitrosilação das proteínas quinase A (PKA) e C (PKC), avalições de dano tecidual e de estresse oxidativo. Ao avaliar a pressão arterial sistólica dos diferentes grupos, o grupo CLP + Tempol apresentou maior elevação pressórica, até mesmo quando comparado com o grupo Controle. Foi possível verificar que em diferentes tecidos a S-nitrosilação foi maior no grupo CLP. Corroborando achados de outros trabalhos, onde mostraram a participação da nitrosilação na fisiopatologia da sepse. Além disso, sugerindo o envolvimento da Snitrosilação na hiporresponsividade vascular, que foi revertida com a utilização do tempol. Alguns tecidos apresentaram maior nitrosilação no grupo CLP, como também menor expressão de PKC deste mesmo grupo. Nas avaliações de estresse oxidativo o grupo CLP + Tempol apresentou um efeito antioxidante, reduzindo o dano por estresse oxidativo. Estes resultados sugerem que o tempol atue como denitrosilante e que a redução da nitrosilação proteica restaura a resposta a noradrenalina, com aparente envolvimento da nitrosilação da PKA e PKC. No entanto, ainda é necessário avaliar de maneira mais detalhada o efeito da reversão da nitrosilação na sepse.

Abstract: Sepsis is a syndrome that affects millions of people every year, in which occurs an exaggerated response of the body to an infection. The worsening of sepsis leads to septic shock, characterized by hypotension and vessel hyperresponsiveness of vasopressors agents. Previous studies indicate the participation of protein Snitrosylation in the maintenance of hypotension in septic animals. S-nitrosylation usually results in the loss of receptors functions and signaling proteins which are related to vasoconstrictors response. The utilization of denitrosylant agents seems like a plausible option to revert this problem. The tempol is a cyclic antioxidant and we believe that it has a denitrosylant action. In this work were used C57BL/6j mice with induced sepsis by cecal ligation and puncture (CLP). The animals were divided in three groups: Control, CLP and CLP + Tempol. The hemodynamic data of the animals was evaluated in awake animals 10 h after the sepsis induction. The CLP + Tempol group received the intravenous tempol and after 2 h a dose-response curve to norepinephrine was performed. Then, the animals were euthanized, and samples were collected: aorta, heart, liver and blood. Analyzes were carried out from these samples, such as total nitrosylation, protein kinase A (PKA) and C (PKC) nitrosylation, tissues dysfunction and oxidative stress. In the systolic blood pressure evaluation, it was possible to obtain expressive values of increase in the pressure of the CLP + Tempol, these highers than the Control group. That S-nitrosylation was higher in various tissues of the CLP group, supporting other studies that have shown the involvement of nitrosylation in sepsis pathophysiology. Furthermore, implying the involvement of Snitrosylation in hyporesponsiveness, which was reversed with the use of tempol. Some tissues present improved nitrosylation in the CLP group, as well as lower PKC expression in the same group. In the oxidative stress evaluations, the CLP + Tempol group exhibited an antioxidant effect, decreasing the oxidative stress damage. This result suggests that the tempol behaves like a denitrosylant and the reduction of the protein nitrosylation restores the norepinephrine response, with possible participation of the PKA and PKC nitrosylation. However, it is still required to evaluate in a more detailed way the effect of the reversal of nitrosylation in sepsis.