Investigação dos mecanismos moleculares de resistência à ceftriaxona em Neisseria gonorrhoeae: o papel do gene penA tipo mosaico e da proteína de ligação à penicilina 2 (PBP2).

Abstract

A gonorreia é uma infecção sexualmente transmissível (IST) causada pela bactéria Neisseria gonorrhoeae com incidência estimada em mais de 80 milhões de casos anuais na população mundial. Além dos desfechos deletérios à saúde sexual e reprodutiva, outro fato importante é a evolução do perfil de resistência do gonococo a várias classes de antimicrobianos disponíveis na clínica. A resistência às cefalosporinas de terceira geração é um fenômeno grave para a saúde pública pois a ceftriaxona é considerada como a última alternativa terapêutica empírica eficaz contra as infecções gonocócicas. No entanto, desde 2009 quando foi descrito o primeiro caso de N. gonorrhoeae resistente a esse fármaco no Japão, observa-se uma difusão internacional de cepas multirresistentes, fato que reforça a importância dos programas de vigilância de resistência do gonococo com a finalidade de interromper cadeias de transmissão, orientar o melhor tratamento e impedir o aparecimento de casos de gonorreia intratáveis. Nesse sentido, este trabalho investigou o mecanismo de resistência à ceftriaxona em N. gonorrhoeae, principalmente o papel do gene penA tipo mosaico e da proteína de ligação à penicilina 2 (PBP2). Para alcançar esse objetivo, cepas sensíveis foram geneticamente transformadas em cepas resistentes à ceftriaxona através de um protocolo de transformação por cocultivo e cultivo com amplicons do gene penA. Após a transformação, as cepas que adquiriram o gene penA tipo mosaico manifestaram um fenótipo de alta resistência à ceftriaxona, sendo então realizada a genotipagem das cepas por NG-MAST e sequenciamento genômico da região do gene penA. As análises dos resultados do sequenciamento demonstraram que a cepa sensível adquiriu substituições de aminoácidos consideradas críticas para a aquisição do fenótipo resistente à ceftriaxona como A311V, T316P e T483S. Essas mutações alteram a conformação do sítio-ativo de ligação da ceftriaxona na PBP2, diminuindo a acilação necessária para o efeito de inibição da enzima. Sendo assim, pode-se concluir que a transformação é um mecanismo de aquisição do gene penA tipo mosaico com papel determinante na resistência à ceftriaxona em N. gonorrhoeae.