Caracterização do domínio proteico de endereçamento à zona de adesão flagelar de Trypanosoma cruzi

Abstract

O gênero Trypanosoma, ao qual pertencem os parasitos Trypanosoma brucei e Trypanosoma cruzi, compreende parasitos unicelulares que possuem um único flagelo. Este flagelo emerge da bolsa flagelar e é lateralmente aderido ao corpo celular do parasito através da Zona de Adesão Flagelar (FAZ). A adesão flagelar é mantida pelas proteínas transmembrana FLAs e FLABPs, que interagem por meio de suas porções extracelulares, e é essencial para a motilidade, divisão celular e infectividade do parasito. Apesar da localização de FLABP ser fundamental para o seu funcionamento, não se sabe como esta proteína é direcionada e ancorada na FAZ. Recentemente, observou-se uma sequência conservada entre tripanosomatídeos de 12 resíduos de aminoácidos localizada na porção intracelular de FLABP. A hipótese deste trabalho é que essa sequência, chamada provisoriamente de Flagellar Addressing Protein Domain (FD), é importante para a localização de FLABP na FAZ. Desta forma, teve-se como objetivo avaliar se a expressão da região FD, fusionada à proteína fluorescente GFP, seria suficiente para direcionar a GFP à FAZ de T. cruzi. Para tal, a partir de reações em cadeia de polimerase e clonagem, o plasmídeo pTREX-eGFP foi alterado para permitir a expressão de construções da região FD fusionadas à molécula GFP na região N-terminal. O peptídeo-sinal do gene de flabp e as diferentes construções da região FD foram clonados no vetor pGEM-T easy e serão futuramente subclonados na versão modificada do pTREX-eGFP, gerando os plasmídeos necessários para transfectar T. cruzi e avaliar se região FD influencia na localização de GFP.