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Abstract:
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A intoxicação é conhecida como a manifestação de sintomas em decorrência da exposição à agentes tóxicos, como os medicamentos, quando não utilizados de forma correta, e as drogas de abuso. Com o crescimento de casos, o Centro de Informações e Assistência Toxicológicas de Santa Catarina (CIATox/SC) relatou que os benzodiazepínicos e os antidepressivos tricíclicos, como a amitriptilina, estão listados entre os 10 principais medicamentos causadores de intoxicação. A cocaína aparece em segundo lugar na lista de drogas de abuso registradas pelo CIATox/SC, com 365 casos. Assim, a análise toxicológica de urgência é indispensável tanto para o diagnóstico laboratorial quanto para auxílio no prognóstico. O objetivo do presente projeto foi validar um método analítico para identificação de benzoilecgonina, cocaína e amitriptilina em amostras de urina proveniente de pacientes do CIATox/SC, por meio da microextração em fase solida dispersiva (d-SPE) e análise realizada por cromatografia liquida de alta eficiência acoplada a detector de arranjo de diodo (CLAE-DAD). No atual trabalho foi realizado a validação por meio do método qualitativo com o objetivo de garantir a confiabilidade do método, visando a ampliação dos exames laboratoriais ofertados pelo LPtox. Assim, utilizou-se de guias para montar um plano de validação, por meio da Guidance for the validation of analytical Methology and Calibration of Equipament used for Testing of Illicit Drugs in Seized Materials and Biological Speciments (UNODC) e a resolução da ANVISA (RDC N 27/ 2012 e RDC N 166/2017). Nesse sentido, os parâmetros avaliados foram: limite inferior de quantificação (LIQ), o qual se testou diferentes valores de concentração para obter o menor valor, obtendo um LIQ de 1300 ng/mL para benzoilecgonina e para cocaína e amitriptilina obteve-se 100 ng/mL. Avaliou-se também a linearidade do método por meio do estabelecimento de 5 valores de concentrações para cada analito, assim, a benzoilecgonina não apresentou uma curva analítica satisfatória, já que o R da equação ficou em torno de 0,80, ademais, a cocaína e amitriptilina apresentaram valor de R de 0,987 e 0,960. Outro parâmetro realizado foi a precisão em 2 diferentes dias, obtendo-se valores satisfatórios e dentro das especificações da resolução da ANVISA, com valores inferiores a 15% em três diferentes concentrações. O teste do efeito residual também compôs o atual projeto por meio da injeção de amostras contendo os analitos para posteriormente injetar uma amostra branco, o que demonstrou que o equipamento não possui resíduos das analises anteriores e que os resultados foram de fato verdadeiros. Já a seletividade foi realizada pela injeção de 6 amostras brancos diferentes que permitiu a observação de que o método é seletivo ao diferenciar o analito quando na presença de outros componentes possivelmente presentes na amostra. Por fim, testou-se a estabilidade a curto prazo que consistiu em preparar os padrões de interesse e realizar a microextração e análise no dia 0 e nova análise após 72 horas do preparo, o teste foi realizado na concentração que consiste o limite superior de quantificação (LSQ) e obteve-se resultados satisfatórios que demonstra estabilidade do método por meio do coeficiente de variação em relação ao dia zero, que resultou para cocaína e amitriptilina respectivamente de 13,3% e 15,1%. Com os parâmetros da validação devidamente testados, realizou-se a análise da aplicabilidade da técnica em 20 amostras provenientes de pacientes com suspeita de intoxicação atendidos pelo CIATox/SC, resultando na identificação dos analitos, inclusive com detecção em amostras cujo resultado no teste rápido de imunocromatografia havia sido não detectado. Assim, fica comprovada a confiabilidade do método para complementar a ofertar de exames pelo LPtox. |
