Desenvolvimento do protocolo de micropropagação de poejo menta-pulégio (Mentha pulegium L.)

Abstract

A espécie Mentha pulegium conhecida popularmente por poejo, possui inúmeras características benéficas como antissépticas, medicinais, alimentícias e cosméticos. Multiplica-se facilmente por estacas de ramos, rizomas e eventualmente por sementes. A micropropagação, caracterizase por ser um método que vem se difundindo entre as técnicas de propagação, além de promover rápida multiplicação, garante boa sanidade e uniformidade das mudas. O presente trabalho teve como objetivo estabelecer um protocolo de micropropagação de M. pulegium, baseado na organogênese direta, utilizando diferentes fitorreguladores além de avaliar diferentes substratos na aclimatização ex vitro das mudas. Para o estabelecimento in vitro segmentos nodais, utilizados como explantes, foram desinfestados em soluções com Tween 20; imersão em álcool (70%); imersão em hipoclorito de sódio (1%) e; três enxágues em água tipo 2 e autoclavada, sempre sob agitação. Após a assepsia, efetuou-se a excisão das extremidades, com o intuito de retirar as partes com necroses e uniformizar o tamanho dos segmentos nodais e a inoculação em diferentes meios de cultura. Foram efetuados dois ensaios sucessivos, a fim de superar os problemas de contaminação in vitro. Para o estabelecimento e a indução in vitro testou-se utilizando um delineamento inteiramente casualizado (DIC), o meio MS, suplementados com fitorreguladores ANA (0 e 1 µM) em combinação com BAP (0 e 1 µM). Avaliações semanais foram efetuadas para coletar dados de porcentagem de sobrevivência, de contaminação, de indução de brotos e de calo. Para a multiplicação in vitro, foi utilizado um fatorial 2x3, testando o meio de cultura básico MS, suplementados com diferentes concentrações dos fitorreguladores ANA (0 e 2 µM) em combinação com BAP (0; 2 e 4 µM). Quinzenalmente, foram coletados dados de números de brotos, de nós e raízes e altura das brotações. Brotações alongadas, de 5 cm e 3 cm, foram submetidas ao processo de aclimatização em ambiente ex vitro, com o transplante em diferentes substratos comerciais, contendo casca de pinus, casca de arroz, turfa e vermiculita. Dados de números de brotos e nós, altura de plantas, tiveram avaliações quinzenais aos 15, 30 e 45 dias, formação e tamanho de raízes foram coletados somente na última avaliação aos 45 dias. Na fase de indução, foi possível observar que o meio de cultura MS isento de fitorreguladores, destacou-se no parâmetro altura, não havendo diferença estatística entre os demais parâmetros. Na fase de multiplicação in vitro em concentrações de 2 µM e 4 µM de BAP, bem como, 2 µM de BAP + 2 µM de ANA, suplementados ao meio básico MS, resultou nos melhores valores de número de brotos, de nós e altura das brotações. Não havendo diferença estatística para formação de raízes em nenhum tratamento. Brotações de 5 cm em substrato Turfa fértil® e Turfa fértil® mais Carolina soil® se sobressaíram em todos os parâmetros em relação aos demais substratos utilizados.

The Mentha pulegium species, popularly known as pennyroyal, has numerous beneficial characteristics such as antiseptic, medicinal, food and cosmetics. Multiplied by branch cuttings, rhizomes and eventually by seeds. Micropropagation, characterized by being a method that has been spreading among propagation techniques, in addition to promoting rapid multiplication, guarantees good health and uniformity of the seedlings. This work aimed to establish a micropropagation protocol for M. pulegium, based on direct organogenesis, using different phytoregulators, in addition to evaluating different substrates in the ex vitro acclimatization of seedlings. For the in vitro establishment nodal segments, used as explants, were disinfested in solutions with Tween 20; immersion in alcohol (70%); immersion in sodium hypochlorite (1%) and; three rinses in type 2 water and autoclaved, quickly and always under agitation. After asepsis, the extremities were excised in order to remove the parts with necrosis and to standardize the size of the nodal segments and inoculation in different culture media. Two successive tests were carried out in order to overcome the problems of in vitro contamination. For in vitro establishment and induction, a completely randomized design (CRD) was tested using MS medium, supplemented with NAA phytoregulators (0 and 1 µM) in combination with BAP (0 and 1 µM). Weekly evaluations were carried out to collect data on percentage of survival, contamination, shoot induction and callus. For in vitro multiplication, a 2x3 factorial was used, testing the MS basic culture medium, supplemented with different concentrations of NAA phytoregulators (0 and 2 µM) in combination with BAP (0; 2 and 4 µM). Biweekly, data were collected on the number of shoots, nodes and roots, and height of shoots. Elongated shoots, measuring 5 cm and 3 cm, were submitted to the acclimatization process in an ex vitro environment, with transplantation in different commercial substrates, containing pine bark, rice husk, peat and vermiculite. Data on numbers of shoots and nodes, plant height, were evaluated fortnightly at 15, 30 and 45 days, formation and size of roots were collected only in the last evaluation at 45 days. In the induction phase, it was possible to observe that the MS culture medium free of phytoregulators stood out in the height parameter, with no statistical difference between the other parameters. In the in vitro multiplication phase at concentrations of 2 µM and 4 µM of BAP, as well as 2 µM of BAP + 2 µM of NAA, supplemented with basic MS medium, resulted in the best values for number of shoots, nodes and height of shoots. There was no statistical difference for root formation in any treatment. Shootings of 5 cm in substrate Turfa fértil® and Turfa fértil® plus Carolina soil® excelled in all parameters in relation to the other substrates used.