Ação de óleos essenciais de plantas: inibição do crescimento micelial e germinação de escleródios do fungo Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary.

Abstract

O fungo Sclerotinia sclerotiorum é causador da doença popularmente conhecida como mofo branco que afeta cerca de 650 espécies de plantas. As plantas, de modo geral, apresentam em sua composição metabólitos secundários, denominados de biocompostos que atuam na sua proteção. Os óleos essenciais apresentam característica lipofílica, o que permite maior permeabilidade na membrana celular, maior seletividade, são biodegradáveis e apresentam compostos com inúmeros modos de ação. Com isso, o presente trabalho tem como objetivo, avaliar os óleos essenciais das plantas de alho (Allium sativum), cravo-da-índia (Syzygium aromaticum), lavanda (Lavandula angustifolia) e melaleuca (Melaleuca spp.) sobre a inibição do crescimento micelial e germinação dos escleródios de Sclerotinia sclerotiorum. Para avaliar o potencial de inibição de crescimento micelial, foi utilizado alíquotas do óleo essencial de alho (0, 50, 150 e 300 ppm), cravo-da-índia (0, 150, 300 e 500 ppm), lavanda e melaleuca (0; 250, 500 e 1.000 ppm) que foram adicionadas em meio fundente de BDA autoclavado, acrescido de antibiótico (Estreptomicina e Penicillina) 500 mg/L-1, Tween20® a 0,5 %. Posteriormente foi adicionado um disco de micélio do patógeno de 5 mm de diâmetro no centro das placas. Os dados foram avaliados utilizando análise de regressão, a 5% de significância pelo software R. O potencial inibitório da germinação dos escleródios foi avaliado através do método de imersão e por meio da volatilização dos escleródios nos óleos essenciais. No ensaio de imersão, foram utilizadas as concentrações de 2.000 e 5.000 ppm de cada óleo essencial em alíquotas de 4 mL, juntamente com água e Tween20®., o qual foi depositado em meio AA (ágar-água) já solidificado, e posterior adição de cinco escleródios de forma equidistante. O efeito da volatilização foi avaliado na concentração de 100 µL de cada óleo essencial, com deposição em um chumaço de algodão fixado na tampa da placa de Petri com meio AA (ágar-água). Posterirormente efetuou-se a deposição de cinco escleródios de forma equidistante. O parâmetro de avaliação foi a ocorrência ou não da germinação dos escleródios. Os dados foram submetidos ao Teste G-rho de Harrington e Fleming (1982) e às curvas de sobrevivência de Kaplan-Meier, no software R. Os tratamentos que não apresentaram germinação foram submetidos ao Teste de Trifenil Cloreto de Tetrazólio (TCT), com finalidade de avaliar a viabilidade dos escleródios. O ensaio de crescimento micelial resultou na inibição total em todas as concentrações com alho, lavanda e melaleuca com uso de 1000 ppm. O tratamento com cravo-da-índia apresentou crescimento nas diferentes concentrações. A imersão dos escleródios inibiu a germinação em 100% no tratamento com alho na concentração de 2000 ppm e 5000 ppm e de cravo-da-índia em 5000 ppm. O efeito da volatilização impediu a germinação dos escleródios dos tratamentos de alho, cravo-da-índia e melaleuca. Os escleródios não germinados apresentaram viabilidade parcial (60%), quando submetidos ao TCT, observados no tratamento de imersão com óleo essencial de alho (2000 ppm). Os resultados do presente trabalho, constataram o potencial antifúngico dos óleos essenciais como forma de controle alternativo in vitro do patógeno S. sclerotiorum

The fungus Sclerotinia sclerotiorum causes the disease popularly known as white mold that affects about 650 species of plants. Plants, in general, have secondary metabolites in their composition, called biocompounds that act in their protection. Essential oils have a lipophilic characteristic, which allows greater permeability in the cell membrane, greater selectivity, they are biodegradable and contain compounds with numerous modes of action. Thus, the present work aims to evaluate the essential oils of garlic (Allium sativum), clove (Syzygium aromaticum), lavender (Lavandula angustifolia) and melaleuca (Melaleuca spp.) plants on growth inhibition. mycelial growth and germination of Sclerotinia sclerotiorum sclerotia. To evaluate the mycelial growth inhibition potential, aliquots of garlic essential oil (0, 50, 150 and 300 ppm), cloves (0, 150, 300 and 500 ppm), lavender and tea tree (0 ; 250, 500 and 1,000 ppm) which were added in autoclaved PDA melting medium, plus antibiotic (Streptomycin and Penicillin) 500 mg/L-1, 0.5% Tween20®. Subsequently, a 5 mm diameter pathogen mycelium disc was added in the center of the plates. The data were evaluated using regression analysis, at 5% significance by the R software. The inhibitory potential of sclerotia germination was evaluated through the immersion method and through the volatilization of the sclerotia in essential oils. In the immersion test, concentrations of 2,000 and 5,000 ppm of each essential oil were used in 4 mL aliquots, along with water and Tween20®. of five sclerotia in an equidistant way. The effect of volatilization was evaluated at a concentration of 100 µL of each essential oil, with deposition on a cotton swab attached to the lid of the Petri dish with AA medium (agar-water). Subsequently, five sclerotia were placed equidistantly. The evaluation parameter was the occurrence or not of sclerotia germination. The data were submitted to the G-rho Test by Harrington and Fleming (1982) and to the Kaplan-Meier survival curves, in the R software. The treatments that did not show germination were submitted to the Test of Triphenyl Tetrazolium Chloride (TCT), with purpose of evaluating the viability of the sclerotia. The mycelial growth assay resulted in total inhibition at all concentrations with garlic, lavender and tea tree using 1000 ppm. The treatment with cloves showed growth in different concentrations. The immersion of sclerotia inhibited germination by 100% in the treatment with garlic at concentrations of 2.000 ppm and 5.000 ppm and clove at 5.000 ppm. The volatilization effect prevented the germination of the sclerotia from the garlic, clove and tea tree treatments. Non-germinated sclerotia showed partial viability (60%) when submitted to TCT, observed in the immersion treatment with garlic essential oil (2.000 ppm). The results of this work confirmed the antifungal potential of essential oils as an alternative in vitro control of the pathogen S. sclerotiorum.