Microbiota digestiva do Limnoperna fortunei distribuído ao longo do alto Rio Uruguai

Abstract

O objetivo do presente estudo foi identificar a microbiota digestiva do mexilhão-dourado (Limnoperna fortunei) para detectar a presença de microrganismos oriundos de efluentes e possivelmente nocivos à saúde humana e a de peixes, identificar a microbiota digestiva deste invasor e caracterizar a sua estrutura em diferentes estações do ano. As amostragens de L. fortunei foram coletadas em cinco reservatórios de usinas hidrelétricas (UHE), localizadas na região do alto rio Uruguai, Santa Catarina, Brasil. Em cada um dos reservatórios foram amostrados três pontos, para cada ponto 15 mexilhões foram submetidos a biometria e armazenados em caixas térmicas refrigerada (4,0 °C). Posteriormente, cada mexilhão foi aberto assepticamente com auxílio de um bisturi esterilizado para retirada do divertículo digestivo e de porções do intestino, identificado e armazenado individualmente em microtubos livres de RNAse e DNAse e preservados a -20 ºC. Após a extração DNA das bactérias presentes no material coleado, as amostras foram submetidas ao Sequenciamento de Alto Rendimento (SAR) e análises de metagenômica. As análises do SAR revelaram que o L. fortunei presente nos reservatórios de UHE do alto Rio Uruguai possuem uma microbiota que se diferencia entre os pontos coletados, com variações de composição do trato digestivo. Os Filos dominantes foram Proteobacteria, Bacteroidetes e Cyanobacteria, independentemente da estação do ano, tendo sido identificadas 142 Operational Taxonomy Units (OTUs) compartilhadas entre as amostras do inverno e verão que não sofreram influência do período coletado, e que indicaram a formação de uma core microbiota.

Abstract: The objective of the present study was to identify the digestive microbiota of the golden mussel (Limnoperna fortunei) to evaluate the presence of microorganisms from effluents and that are possibly harmful to human and fish health; to identify the digestive microbiota of this invasive microorganism and to characterize its structure in different seasons of the year. The samples of L. fortunei were collected in five reservoirs of hydroelectric plants (UHE), located in the region of the upper Uruguay River, Santa Catarina, Brazil. In each of the reservoirs, three points were sampled, for each point 15 mussels were submitted to biometrics and stored in refrigerated thermal boxes (4.0 °C). Subsequently, each mussel was aseptically opened with the aid of a sterilized scalpel to remove the digestive diverticulum and portions of the intestine, identified and stored individually in RNAse and DNAse-free microtubes and preserved at -20 ºC. After DNA extraction from the bacteria present in the collected material, the samples were submitted to High Throughput Sequencing and metagenomic analysis. The SAR analyzes revealed that the L. fortunei present in the reservoirs of the UHE of the upper Rio Uruguai have a microbiota that differs between the collected points, with variations in the composition of the digestive tract. Furthermore, the dominant phyla were Proteobacteria, Bacteroidetes and Cyanobacteria, regardless of the season. In addition to the identification of 142 Operational Taxonomy Units (OTUs) shared between winter and summer samples that were not influenced by the period collected indicated the formation of a microbiota core.