Desenvolvimento de um protocolo para recebimento, manuseio e práticas de genética molecular com amostras de penas de psitacídeos da espécie Guaruba guarouba para análise de diversidade genética

Abstract

Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de protocolo de manuseio e triagem de penas de aves, além do teste de protocolo de extração de DNA pelo método da Proteinase K para penas de Guaruba guarouba (Psittacidae, Gmelin, 1788) e a utilização das extrações para técnicas moleculares de PCR. As penas foram recebidas de uma população cativa de 23 indivíduos, atualmente residentes do BioParque na cidade do Rio de Janeiro ? RJ. A coleta das penas foi realizada por veterinário da instituição, e foram coletadas de 2 a 4 penas de cobertura das Ararajubas, sendo elas penas maduras ou em crescimento. Para os testes de biologia molecular foram selecionados 5 pares de iniciadores moleculares heterólogos, descritos para espécies filogeneticamente próximas da Ararajuba. As extrações foram realizadas com material genético extraído do cálamo das penas disponíveis, com objetivo de obter DNA das células da epiderme fixadas na parte externa do cálamo, ou ainda do canhão, estrutura vascularizadas presente apenas em penas em desenvolvimento, porém com maior retorno de DNA. Os resultados das extrações de DNA obtidos foram melhores com penas em crescimento, que ainda possuíam tecido de canhão. Os iniciadores de marcadores microssatélites heterólogos específicos de outras espécies amplificaram bandas visíveis em todas as amostras que possuíam canhão, e apenas 3 amostras sem canhão amplificaram todos os iniciadores. As outras tiveram resultados variáveis e bandas fracas, ou nenhuma banda. Todos os iniciadores selecionados amplificaram fragmentos para Ararajuba.

Abstract: The objective of this work was to produce a management and handling protocol for Avian feathers, to test an extraction DNA protocol from Proteinase K method for feathers from Guaruba guarouba (Psittacidae, Gmelin ? 1788), and to test the use of genetic material extracted into molecular techniques, such as PCR. The feathers were received from a captive population of twenty three Golden Conure individuals, residing on BioParque, a zoological institution in Rio de Janeiro ? RJ. Two to four cover feathers were colected by veterinarians from the Zoo, in a mix of mature and growing feathers. To test molecular biology, 5 pairs of heterologous primers were selected, originally targeted for filogenetic related species of Golden Conure. DNA extractions were obtained from genetic material extracted from the calamus of available feathers, from epidermis cells fixated on the calamus exterior of full grown feathers, or from the sheath, vascularized structure presente only on growing feathers (blood feathers), these last ones provide great amount of DNA. The DNA extraction resulted in better material from growing feathers, with sheath still attached. The heterologous microsatellite markers selected for PCR analysis amplified fragments from all samples that contained growing tissue, and only 3 samples without growing tissue amplified all primers. The other samples had variable results, weak bands or even no band at all. All primers selected amplified fragments for Golden Conure.