Efeitos da suplementação dietária com Bacillus subtilis e Bacillus licheniformis na microbiota e saúde intestinal da tilápia-do-nilo

Abstract

O objetivo deste estudo foi avaliar a relação entre adesão in vitro e a capacidade de colonização in vivo de um produto probiótico comercial, contendo as bactérias Bacillus subtilis e Bacillus licheniformis, ao muco intestinal de tilápia-do-Nilo, bem como avaliar os efeitos da suplementação na saúde intestinal dos animais. O ensaio in vitro foi realizado utilizando o muco intestinal retirado de juvenis de tilápia-do-Nilo saudáveis, cultivado em uma microplaca de 96 poços de fundo chato e posteriormente incubado com o produto probiótico em diferentes concentrações de inóculo. Foram realizados dois ensaios in vivo distintos, um com 15 dias a fim de aferir o grau de colonização das bactérias através de métodos de microbiologia baseados em cultura e outro ensaio de 50 dias com a intenção de realizar uma análise molecular refinada da saúde intestinal dos animais, em ambos os ensaios foram coletados dados de desemprenho zootécnico. Durante os ensaios in vivo os animais foram suplementados com o produto probiótico aspergido na ração na proporção de 100 ml Kg-1 de ração. No ensaio in vitro, encontramos evidências da adesão da bactéria probiótica ao muco intestinal da tilápia-do-Nilo, sendo posteriormente embasado no ensaio de alimentação in vivo de 15 dias no qual a contagem de B. liqueniformis no intestino dos juvenis de tilápia-do-Nilo foi significativamente maior no tratamento com o PureGro®, quando comparado com peixes alimentados com uma dieta controle não suplementada. Além disso, no ensaio in vivo de 50 dias, foi possível analisar uma modulação da microbiota do intestino da tilápia-do-Nilo com a suplementação dietária do probiótico. Por meio de métodos moleculares observou-se claramente aumento na riqueza de espécies, maior abundância de espécies autóctones potencialmente probióticas e menor abundância de Aeromonas veronii, um potencial patógeno para peixes, nos animais alimentados com dieta suplementada com o probiótico.

Abstract: The aim of this study was to evaluate the relationship between in vitro adhesion and the in vivo colonization capacity of a commercial probiotic product, containing Bacillus subtilis and Bacillus licheniformis in the intestinal mucus of Nile tilapia, as well as to evaluate the effects of supplementation on the intestinal health of animals. The in vitro assay was performed using intestinal mucus taken from healthy Nile tilapia juveniles, cultured in a 96-well flat-bottomed microplate and subsequently incubated with the probiotic product at different inoculum concentrations. Two in vivo assays were carried out, one with 15 days in order to measure the degree of colonization of bacteria using culture-based microbiology methods and another 50-day assay with the intention of performing a refined molecular analysis of the intestinal health of animals, in both trials and zootechnical performance data were collected. During the in vivo tests, the animals were supplemented with the probiotic product sprinkled on the feed in the proportion of 100 mL Kg-1 of feed. In the in vitro assay, we found evidence of the adhesion of probiotic bacteria to Nile tilapia intestinal mucus, which was later based on the 15-day in vivo feeding assay in which the count of B. liqueniformis in the intestine of fish was significantly higher in treatment with PureGro® when compared to fish fed unsupplemented diet. In addition, in the 50-day in vivo trial, it was possible to analyze a modulation of the Nile tilapia gut microbiota with dietary supplementation of the probiotic. Through molecular methods, an increase in species richness, greater abundance of potentially probiotic autochthonous species and lower abundance of Aeromonas veronii, a potential fish pathogen, was clearly observed in animals fed diet supplemented with the probiotic.