Comparação entre enxerto gengival livre e enxerto de fibroblastos de cultura primária suplementada com plasma rico em plaquetas: estudo em ratos

Abstract

O objetivo deste trabalho foi avaliar a resposta cicatricial de ratos a enxerto de fibroblastos gengivais provenientes de cultura primária suplementada com PRP e semeados em matriz de celulose bacteriana (MCB) e matriz dérmica acelular humana (MDA - Surederm®). Inicialmente foi realizada uma cirurgia de remoção de um pequeno explante de tecido conjuntivo/epitelial da mucosa oral de rato. Logo em seguida, foi realizada a técnica de obtenção do Plasma Rico em Plaquetas (PRP). Então, se realizou a cultura primária de fibroblastos em meio suplementado com PRP, substituindo o Soro Fetal Bovino. Depois de estabelecida a cultura celular, as células foram semeadas nas matrizes e somente então se iniciaram os procedimentos cirúrgicos. Foram realizados defeitos cirúrgicos na mucosa jugal dos ratos com um bisturi circular. Os ratos foram divididos em 06 grupos: I-controle negativo (apenas criação do defeito); II-controle positivo (enxerto gengival livre obtido do palato); III-MCB; IV-fibroblastos em MCB; V-MDA; VI-fibroblastos em MDA. Quinze dias após as cirurgias de enxertia, foram realizadas avaliações clínicas, verificando a regularidade do epitélio e a presença de úlcera, rubor e edema. Foi realizada a biópsia da área operada. Foram obtidos cortes histológicos para coloração em Hematoxilina e Eosina e para realização da técnica imunohistoquímica com os anticorpos anti-a-SMA (marcador de miofibroblastos), e PAN-Cytokeratin (marcador de células epiteliais). A avaliação histológica considerou se ocorreu a reepitelização completa da área operada e classificou o novo epitélio em fino ou regular, com cristas epiteliais e/ou queratina. Também se ralizou a contagem de vasos sanguíneos, células inflamatórias e miofibroblastos. O número de células foi obtido dentro de uma mesma área e classificado em leve, regular ou intenso, e uma análise estatística pelo teste exato de Fisher foi realizada. Os resultados clínicos demonstraram que os grupos testados não apresentaram úlcera e apresentaram epitélio regular, sem rubor e sem edema. Os resultados histológicos demonstraram que estes grupos apresentaram um epitélio regular com cristas epiteliais e queratina, com miofibroblastos presentes no tecido conjuntivo. A técnica de engenharia tecidual realizada obteve resultados clínicos e histológicos semelhantes à técnica de enxerto gengival livre. A cultura primária de fibroblastos suplementada com PRP além de favorecer o processo de cicatrização, viabiliza a técnica para utilização em humanos. As duas matrizes testadas podem ser usadas como arcabouço celular, sendo a MDA a matriz mais indicada em enxertos gengivais livres.<br>

Abstract : The objective of this work was to evaluate in vivo the healing response of rats grafted with gingival fibroblasts from primary culture, seeded in bacterial cellulose matrix (MCB) and human acellular dermal matrix (MDA - Surederm ®). Initially, surgery was performed to remove a small conective / epithelial tissue explant from the oral mucosa of the rat. Soon after, the technique of obtaining the Rich Plasma in Platelet (PRP) was carried out. Then, the primary culture of fibroblasts was performed in medium supplemented with PRP, replacing Fetal Bovine Serum. After the cell culture was established, the cells were seeded in the matrices and only then the surgical procedures began. Surgical defects were performed in the oral mucosa of the rats with a circular scalpel. The rats were divided into 6 groups: I-negative control (defect creation only); II-positive control (free gingival graft obtained from the palate); III-MCB; IV-fibroblasts in MCB; V-MDA; VI-fibroblasts in MDA. Fifteen days after the grafting surgeries, clinical evaluations were performed, evaluating the regularity of the epithelium and the presence of ulcer, flushing and edema. The biopsy of the surgical area was performed. Histological sections were obtained and stained with Hematoxylin and Eosin; and immunohistochemically with anti-a-SMA antibody (myofibroblast marker), and PAN-Cytokeratin (epithelial cell marker). The histological evaluation considered whether a complete reepithelialization of the operated area occurred and then classified the new epithelium as thin or regular, with epithelial ridges and/or keratin. Counting of blood vessels, inflammatory cells and myofibroblasts was also performed. The number of cells was obtained within the same histological area and classified as mild, regular or intense, and a statistical analysis applying Fisher exact test was performed. Clinical results showed that the tested groups had no ulcer and had regular epithelium, no flushing and no edema. Histological results demonstrated that these groups had a regular epithelium with epitelial ridges and keratin and with myofibroblasts present in the connective tissue. The performed tissue engineering technique obtained clinical and histological results similar to the free gingival graft technique. The primary culture of fibroblasts supplemented with PRP besides favoring the cicatrization process, allows the technique for use in humans. The two matrices tested can be used as a cellular scaffold, MDA being the most indicated matrix in free gingival grafts.