Avaliação molecular, estrutural e funcional de enzimas da família Glutationa S-transferase em tecidos de ostras Crassostrea gigas

Abstract

As Glutationa S-Transferases (GSTs) são uma família de enzimas de biotransformação de fase II encontradas na maioria dos filos animais. GSTs são caracterizadas pelo seu envolvimento no sistema de proteção contra uma série de xenobióticos, subprodutos do metabolismo oxidativo e compostos carcinogênicos. Em função disso, suas isoformas são amplamente utilizadas como biomarcadores de contaminação aquática nas mais diversas espécies, incluindo a ostra do Pacífico Crassostrea gigas, referência para estudos com biomarcadores em moluscos bivalves. A realização de uma curadoria manual para a identificação e classificação das isoformas da família de GSTs nos bancos de dados públicos foi realizada por nosso grupo de pesquisa, além de análises in silico de modelagem 3D e atracamento molecular; e dos níveis de transcritos das diferentes isoformas em tecidos de C. gigas. A partir desses resultados prévios, este projeto propõe a subclonagem e expressão em Escherichia coli de uma isoforma da família de GSTs de C. gigas; a purificação da proteína expressada em E. coli e a realização da caracterização cinética da GST expressada e purificada. Estes resultados auxiliarão no aprimoramento do uso e aplicação das GSTs em estudos de biomarcadores de contaminação aquática, além de auxiliar na especificidade dos ensaios enzimáticos de atividade GST, em C. gigas e outras espécies de moluscos bivalves.