Relação entre a mutação F508 e os microrganismos Eubacterium rectale, Faecalibacterium prausnitzii e Pseudomonas aeruginosa com o marcador inflamatório intestinal calprotectina em crianças e adolescentes com fibrose cística

Abstract

Introdução: A Fibrose Cística (FC) é uma doença de origem genética, resultante de mutações no gene Cystic Fibrosis Transmembrane Regulator (CFTR), as complicações da FC estão relacionadas com o tipo da mutação da proteína CFTR sendo a mutação ?F508 a mais conhecida. No intestino uma das consequências da FC é afetar a microbiota intestinal, as evidencias mostram que pacientes com FC têm um padrão de microbiota intestinal que se diferencia quando comparado com um grupo controle sem FC. Objetivo: Avaliar a relação entre os microrganismos E. rectale, F. prausnitzii e P. aeruginosa com a presença da mutação DF508 e a resposta inflamatória intestinal medida pela calprotectina (CLP) fecal em crianças e adolescentes com FC. Métodos: Estudo clínico transversal com pacientes com FC, realizado entre março/2016 a dezembro de 2016, no Hospital Infantil Joana de Gusmão do estado de Santa Catarina (HIJG/SC) em Florianópolis, e inscritos na Associação Catarinense de Assistência ao Mucoviscidótico (ACAM), com 120 sujeitos compostos por crianças e adolescentes distribuídos em Grupo Controle (GC, n = 48, sem FC, atendidos no ambulatório de puericultura), e Grupo FC (GFC, n = 72, atendidos no ambulatório de Fibrose Cística). Dados com distribuição normal foram apresentados em média ± desvio padrão e os assimétricos em mediana e intervalo interquartil: 25° - 75°. O teste t Student e Mann Whitney foram utilizados quando apropriado para verificar a diferença das médias. Análise de regressão linear univariada e multivariada foi realizada entre os GC, GFC, GFCDF508-Homo e GFCDF508-Hetero e as variáveis de ajuste foram idade e sexo. Para avaliar o tamanho do efeito destes dados, foi aplicada a estatística de Cohen. Resultados: A microbiota intestinal avaliada pela técnica de FISH revelou diferença estatisticamente 12 significativa para os microrganismos E. rectale, F. prausnitzii e P. aeruginosa (p < 0,05). As bactérias E. rectale, e F. prausnitzii tiveram sua concentração aumentada no GC quando comparadas aos grupos de FC ao passo que a P. aeruginosa mostrou-se elevada nos grupos com FC quando comparada ao GC, com destaque para o GFCDF508-Hetero que apresentou a maior mediana de concentração de P. aeruginosa (1,77x109mL fezes) e o GFCDF508-Homo que apresentou a menor mediana de concentração da F. prausnitzii (0,0x109mL fezes) a nível intestinal quando comparados com o GC. Em relação a inflamação intestinal avaliada pela CLP fecal foi significativamente maior para todos os grupos da FC (p<0,05). O GFC apresentou a mediana de concentração da CLP fecal 231,3% maior em relação à mediana de concentração do GC, sendo que o maior aumento foi de 325,8% no GFCDF508-Homo. Conclusão: A FC pode contribuir para o comprometimento do estado nutricional, para a alteração da microbiota intestinal e para a presença da inflamação intestinal e quando os pacientes com FC apresentam a mutação DF508Homozigoto, todas essas alterações parecem estar exacerbadas.

Abstract : Background: Cystic Fibrosis (CF) is a genetic disease, resulting from mutations in the Cystic Fibrosis Transmembrane Regulator (CFTR) gene, CF complications are related to the mutation type of the CFTR protein, the ?F508 mutation is the most known. In the intestine one of the consequences of CF is to affect the gut microbiota, the evidence shows that patients with CF have a pattern of intestinal microbiota that differs when compared to a control group without CF. Objective: To evaluate the relationship between the E. rectale, F. prausnitzii and P. aeruginosa microorganisms with the presence of the DF508 mutation and the intestinal inflammatory response measured by fecal calprotectin (CLP) in children and adolescents with CF. Subjects and Methods: A crosssectional clinical study with patients with CF, conducted between March 2016 and December 2016, at the Joana de Gusmão Infant Hospital in the state of Santa Catarina (HIJG / SC) in Florianopolis, and enrolled in the Catarinense Association for Mucovisoid Care (ACAM) with 120 subjects composed of children and adolescents distributed in the Control Group (CG, n = 48, without CF, attending the child care clinic), and FC Group (GFC, n = 72, attended at the Cystic Fibrosis outpatient clinic). Data with normal distribution were presented in mean ± standard deviation and asymmetric in median and interquartile range: 25 ° - 75 °. The Student t test and Mann Whitney test were used when appropriate to verify the difference of means. Univariate and multivariate linear regression analysis was performed between GC, GFC, GFCDF508-Homo and GFCDF508-Hetero and adjustment variables were age and sex. To evaluate the size of the effect of these data, Cohen's statistic was applied. Results: The intestinal microbiota evaluated by the FISH technique revealed a statistically significant difference for the E. rectale, F. prausnitzii and P. aeruginosa (p < 0.05) 14 microorganisms. The bacteria E. rectale, and F. prausnitzii had their concentration increased in the GC when compared to the groups of FC whereas the P. aeruginosa showed to be elevated in the groups with CF when compared to the GC, emphasizing the GFCDF508-Hetero that presented the highest median concentration of P. aeruginosa (1.77x109mL feces) and GFCDF508-Homo, which presented the lowest median concentration of F. prausnitzii (0.0x109mL feces) at intestinal level when compared to the CG. In relation to intestinal inflammation evaluated by fecal CLP was significantly higher for all CF groups (p < 0.05). The GFC presented the median fecal CLP concentration 231.3% higher than the median CG concentration, with the highest increase being 325.8% in GFCDF508-Homo. Conclusion: The CF can contribute to impaired nutritional status, altered intestinal microbiota and the presence of intestinal inflammation, and when the patient has the homozygous DF508 mutation, all of these changes appear to be exacerbated.