Avaliação imuno-histoquímica das proteínas HDAC1 e HDAC2, HAT1 e DNMT1 e DNMT3a em epitélio de revestimento não neoplásico adjacente a carcinomas de células escamosas de lábio

Abstract

O presente estudo teve como objetivo estudar e comparar a expressão imuno-histoquímica das proteínas DNA metiltransferases (DNMT1 e DNMT3a), histona acetiltransferase (HAT1) e histona desacetilases (HDAC1 e HDAC2) em epitélio de revestimento não-neoplásico (ERNN) adjacente às áreas de carcinoma de células escamosas de lábio (CEL) de maneira a verificar a expressão dessas enzimas e a relação com o desenvolvimento do tumor maligno de lábio. Assim, 10 casos foram submetidos a reações de imuno-histoquímica pelo método da streptavidina-biotina-peroxidase, utilizando os anticorpos anti-DNMT1, anti-DNMT3a, anti-HDAC1, anti-HDAC2 e anti-HAT1 e posterior captura de seis campos consecutivos da região do ERNN, após determinação dos limites do CEL, sob aumento de 400x, em microscópio acoplado a um sistema de captura digital. A avaliação da expressão nuclear se deu pela contagem manual dos núcleos corados em marrom (positivos) e azul (negativos), por meio do software ImageJ, posterior estabelecimento da proporção das células positivas para cada amostra e comparação por meio dos testes de Comparação Múltipla Kruskal-Wallis e Coeficiente de Correlação de Spearman. Os resultados denotam existir diferença significativa (p<0,05) no percentual de imunopositividade entre a expressão da enzima DNMT3a com as proteínas HAT1, HDAC1, HDAC2 e DNMT1. Também foi possível encontrar forte correlação entre HDAC2 e DNMT1 (r=0,72; P=0,0369). Não obstante a inviabilidade de obtenção de maior número amostral, sugere-se que o ERNN é um tecido que, apesar de não conter características morfológicas sugestivas de malignização, já expressa padrões de imunopositividade de proteínas envolvidas em mecanismos de alteração epigenética semelhantes ao de neoplasias de lábio, podendo assim estar condicionado ao processo de fotocarcinogênese.

This study aimed to investigate the proteins DNA methyltransferase (DNMT1 and DNMT3a), histone acetyltransferase (HAT1) and histone deacetylase (HDAC1 and HDAC2) immunohistochemical expression in non-neoplastic epithelium (NNE) adjacent to areas of lip squamous cell carcinoma in order to evaluate the expression of those enzymes and relate the results with carcinogenesis. Ten (10) cases of NNE were selected for immunohistochemical investigation. The enzymes were detected through the streptavidin-biotin-peroxidase, and incubated with anti-DNMT1 antibody, anti-DNMT3a, anti-HDAC1, anti-HDAC2 and anti-HAT1. For each sample, a minimum of 400 cells were manually counted with the software ImageJ in six consecutive fields, at a magnification of 400x, captured with a light microscope bound to a digital image system, obtaining the positive (brown) and negative (blue) proportion of the enzymes nuclear expression. Statistical comparisons were analyzed by Kruskal-Wallis test and Spearman’s correlation test. The differences between the immunopositivity found of enzyme DNMT3 with HAT1, HDAC1, HDAC2 and DNMT1 were statistically significant (p<0,05). Also, the strong correlation observed among HDAC2 and DNMT1 (r=0,72; P=0,0369) was statistically significant. Despite the limited sample collected, it is suggested that the NNE represents a tissue that already expresses immunopositivity patterns of proteins related to processes of epigenetic alterations similar to the ones found in lip neoplasia.