Análise comportamental e imuno-histoquímica dos efeitos do tratamento prévio com canabidiol na formação e manutenção de memórias aversivas generalizadas em ratos

Abstract

O canabidiol (CBD) é capaz de atenuar a formação e manutenção de memórias aversivas em animais de laboratório. Além disso, o CBD é capaz de estimular a neurogênese hipocampal adulta, que está envolvida na separação de padrões, que faz com que experiências em contextos similares não sejam sobrepostas, mantendo a especificidade de cada memória. Com base nisso, o objetivo deste estudo foi investigar a formação e manutenção de memórias aversivas mais generalizadas, que são resistentes ao prejuízo de reconsolidação induzido pela clonidina (CLO), em animais que já tinham sido tratados previamente com CBD por um ou quatorze dias. A hipótese de trabalho foi de que o CBD atenuaria a memória generalizada, aumentaria o número de células doublecotina (DCX) tornando a memória mais sensível à CLO. Foram utilizados dois protocolos para induzir uma memória aversiva generalizada: (A) associação de um condicionamento de medo contextual moderado com a hiperativação noradrenérgica induzida pela ioimbina, e (B) uso de um condicionamento de medo contextual mais intenso. Em animais administrados uma única vez com CBD (0,1-10 mg/kg) três dias antes do protocolo A , o tratamento com CBD foi capaz de atenuar significativamente a generalização da memória, tornando-a susceptível ao efeito de CLO quando administrada durante a reconsolidação nesse protocolo. Um resultado similar foi observado após tratamento crônico com CBD (10 mg/kg). No protocolo B , foi testada apenas a dose maior de CBD, com ou sem administração de CLO durante a reconsolidação. O tratamento agudo com CBD não foi capaz de prevenir a formação de uma resposta generalizada nesse protocolo, sugerindo que o efeito observado em A pode ter relação específica com o efeito do CBD em um protocolo de hiperativação noradrenérgica. O tratamento crônico, por outro lado, foi capaz de prevenir a generalização, independentemente da administração de CLO. Para avaliar a geração de neuroblastos e seu estágio de maturação dendrítica, os encéfalos foram processados e analisados por imuno-histoquímica após a realização do último teste comportamental. Relativo ao controle, o CBD aumentou significativamente o número de células DCX positivas no giro denteado do hipocampo quando administrado sozinho, mas não em combinação com a CLO. A seguir, realizamos a caracterização da maturação dendrítica dessas células. O CBD aumentou o número de células novas nos últimos estágios de maturação. A CLO foi capaz de aumentar ainda mais o número de células DCX nos últimos estágios de maturação. Como o CBD aumentou o número de células DCX e acelerou a maturação dos neurônios associados com a separação dos padrões, isso tornaria a memória menos generalizada e, possivelmente mais susceptível a modificações. Coletivamente, os resultados desse trabalho sugerem que o tratamento prévio com CBD influência a formação e manutenção de memórias aversivas.

Abstract : Cannabidiol (CBD) has been reported to attenuate the formation and maintenance of aversive memories in laboratory animals. Moreover, CBD is capable of increasing hippocampal neurogenesis, related to pattern separation, what makes memory more specific and precise. Based on the above, the objective of this study was to investigate the formation and maintenance of generalized fear memories, which are more resistant to reconsolidation disruption induced by clonidine (CLO), in animals early treated with CBD for one or fourteen days. The working hypothesis was that CBD could attenuate the generalized memory, an effect associated with changes in doublecortin (DCX) cells, turning memory susceptible to CLO. Two conditioning protocols were used to induce a generalized memory: (A) association of fear conditioning with enhanced noradrenergic activity induced by yohimbine and (B) ufear conditioning with more intense shocks. In animals given acute CBD (0.1- 10 mg/kg) three days before "A" protocol, CBD treatment was capable of attenuate generalized memory, allowing CLO disrupting effects when given during reconsolidation. Similar result was found after treatment with chronic CBD (10 mg/kg). On "B" protocol the highest dose of CBD was used, with or without CLO administration during reconsolidation. Acute CBD treatment was not able to prevent generalized fear response in this protocol, suggesting that the effect observed in protocol "A" may be specifically related to protocols with enhanced noradrenergic activity. Chronic CBD, on the other hand, was capable of preventing generalization, independently of CLO administration. Compared with control group CBD enhanced the number of DCX cells when administrated alone, but not with CLO treatment combination. The next step was characterizing dendritic maturation stage of these cells. In that case CBD increased the last stages of maturation cells. CLO was capable of further increase the number DCX cells on the last maturation stages. The enhanced number of DCX cells and the accelerated maturation process caused by CBD could be associated to a better pattern separation, turning memory into a less generalize form, and possibly more susceptible to pharmacological interventions. Altogether, the present results provide evidence that early CBD treatment modulates the formation and maintenance of aversive memories.