Avaliação do efeito dose-resposta do inibidor seletivo Pimozida sobre células de carcinoma epidermoide bucal humano

Abstract

INTRODUÇÃO: Dentre os vários tipos de câncer de cabeça e pescoço, o mais prevalente é o Carcinoma Epidermoide Bucal (CEB). Acredita-se que o comportamento dessa lesão esteja relacionado à presença das células-tronco neoplásicas (CTN), onde este grupo celular seria o responsável pela resistência à múltiplas drogas, metástase e recidivas. Atualmente, estudos têm analisado moléculas inibidoras seletivas como Pimozida. Esse medicamento atua sobre o complexo USP1/WDR48, o qual é um dos responsáveis por manter as CTN em estado proliferativo e indiferenciado. OBJETIVO: Avaliar o efeito dose-resposta do inibidor seletivo Pimozida sobre as células de CEB humano. METODOLOGIA: Realizou-se a cultura celular no meio de Eagle modificado por Dulbecco de uma linhagem de células de CEB humano. A linhagem foi plaqueada em placas de 96 poços na concentração de 4.000 células por poço e mantida em incubadora, em condições ideais, por 24 horas para a aderência. Após, realizou-se curvas dose-resposta de citotoxicidade de células tratadas com Pimozida nos tempos de 12, 24, 48 e 72 horas e em concentrações de 0, 1, 5, 10 e 15µM. Um grupo de células recebeu o Pimozida adicionado ao meio de cultura padrão, enquanto no outro grupo o medicamento foi incorporado ao meio sem adição de soro fetal bovino (SFB). Posteriormente, a citotoxicidade foi aferida pelo teste de viabilidade celular através da atividade mitocondrial das células no espectrofotômetro (MTT). RESULTADOS: Observou-se que quanto maior o tempo de contato do medicamento com as células, maior é a sua efetividade. Isso porque no resultado do grupo de 72 horas de tratamento com 15µM de concentração, observou-se uma diminuição da viabilidade celular de 55,3% (p=0,000*) no grupo com SFB e 33,7% (p=0,004*) no grupo sem SFB quando comparados aos seus controles negativos. Já no grupo de 12 horas essa redução foi de apenas 34,8% (p=0.066) no grupo com SFB e 1,6% (p=0.911) sem SFB. CONCLUSÃO: A partir desses resultados pode-se concluir que este medicamento é capaz de promover a diminuição da viabilidade celular de células neoplásicas e, por essa razão, tem potencial para ser um novo agente terapêutico.

INTRODUCTION: Among the various types of cancer of the head and neck, the most prevalent is Squamous Cell Carcinoma (SCC). The OSCC behaviour may be related to presence of cancer stem cells, which are responsible for chemotherapy resistance, metastasis and recidive. Currently, studies have analyzed selective inhibitory molecules such as Pimozide. This drug acts on the complex USP1/WDR48, which is responsible for the CSC proliferative and undifferentiated state maintenance. OBJECTIVE: The purpose of this study was to evaluate the dose-response effect of the selective inhibitor Pimozide on SCC human cells SCC. METHODS: Cell culture from a line cell human SCC was performed using Dulbecco's modified Eagle's media. The lineage was plated in 96-well plates at the concentration of 4,000 cells per well and incubated under ideal conditions for 24 hours for adherence. After that, dose-response cytotoxicity curves of Pimozide-treated cells were performed at 12, 24, 48 and 72 hours at concentrations of 0, 1, 5, 10 and 15μM. One group received Pimozide and standard culture media, while in the other one the drug was added to media without fetal bovine serum (FBS). Subsequently, the cytotoxicity was measured by the cell viability test through mitochondrial cell activity in the microplate reader/spectrophotometer (MTT). RESULTS: Longer intervals provide more contact time between the drug and cells, consequently, more effectiveness can be observed. Using 15μM concentration for 72 hours, the cell viability decreased 55,3% (p = 0.000 *) in the group with FBS and 33,7% (p = 0.004 *) in the group without FBS when compared to their negative controls. In the 12-hour group, this reduction was only 34,8% (p = 0.066) in the SFB group and 1.6% (p = 0.911) without SFB. CONCLUSIONS: This drug is able to promote the reduction of the cellular viability of neoplastic cells and, therefore, has potential to be a new therapeutic target.