Avaliação da citotoxicidade de microesferas de PLGA com sinvastatina encapsulada

Abstract

A perda do elemento dental, ou até mesmo a doença periodontal e sua consequente perda óssea, fazem com que estudos por estratégias e/ou materiais regeneradores sejam frequentes na odontologia, principalmente devido a busca incessante pela estética. Devido às suas características biológicas e mecânicas, o osso exige estratégias complexas para permitir a reconstituição da sua estrutura e função. Sendo assim, este estudo teve por objetivo avaliar in vitro a biocompatibilidade de microesferas de PLGA contendo sinvastatina (SIN) para a obtenção de um biomaterial de preenchimento a ser utilizado na regeneração óssea. Para a realização desta pesquisa, outras três importantes etapas foram realizadas, sendo elas a produção, caracterização e esterilização das microesferas de PLGA com SIN encapsulada. As microesferas, com e sem SIN, foram produzidas através do método de simples emulsão e evaporação do solvente. A relação obtida e utilizada neste estudo entre fármaco e polímero foi de 0,03% m/m. A morfologia foi avaliada através da microscopia eletrônica de varredura (MEV) e as amostras foram esterilizadas por meio do óxido de etileno para serem submetidas ao teste de citotoxicidade. A avaliação da citotoxicidade das microesferas de PLGA e PLGA+SIN foi realizada através do teste MTS [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium, inner salt]. Além disso, foram utilizadas linhagens de fibroblastos L929 (American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA, 2593™), pré-osteoblastos MC3T3-E1 subclone 4 (American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA, 2593™) e células-tronco obtidas por cultura primária de tecido adiposo de bolas de Bichat. Os testes foram realizados em triplicata, utilizando placas de 96 cavidades, onde as células foram cultivadas a uma densidade de 2x104 por cavidade, e incubadas a 37 °C e 5% de CO2. Os tempos experimentais foram de 1, 3 e 7 dias. Os resultados obtidos foram promissores, uma vez que tanto as amostras com SIN, quanto as sem SIN não foram tóxicas às células testadas. Portanto, pode-se sugerir que estas são promissoras ferramentas para estudos futuros de diferenciação osteogênica.

The loss of a dental element, or even periodontal disease and its consequent bone loss, demand that studies involving strategies or regenerative materials be frequent topics in dentistry, mainly due to the patients incessant appeal for esthetics. Because of its biological and mechanical characteristics, bone tissue requires complex strategies to allow reconstitution of its structure and function. In this sense, the aim of this study was the evaluation of the in vitro biocompatibility of PLGA microspheres containing simvastatin to obtain a filling biomaterial to be used in bone regeneration. For the accomplishment of this research, three other important steps were carried out: the production, characterization and sterilization of the PLGA microspheres with encapsulated simvastatin. The microspheres, with and without simvastatin, were produced by the simple method of emulsion and evaporation of the solvent. The proportion between drug and polymer obtained and used in this study was 0,03% m/m. Their morphology was obtained by scanning electron microscopy and the samples were sterilized by ethylene oxide, in order to be submited through the cytotoxicity test. The cytotoxicity of the PLGA and PLGA+Simvastatin microspheres were evaluated by the MTS [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium, inner salt] test. Besides that, strains of L929 fibroblasts (American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA, 2593™), MC3T3-E1 subclone 4 pre-osteoblasts (American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA, 2593™) and stem cells obtained by primary adipose tissue culture from Bichat balls were used. Tests were performed in triplicate, using plates of 96 cavities, where the cells were cultured at a density of 2x10⁴ per cavity, and incubated at 37°C (98,6°F) and 5% of CO². Experimental times were of 1, 3 and 7 days. The results obtained were promising, since both samples (with and without simvastatin) were not toxic to the cells tested. Thus, it can be argued that they are promising instruments for future studies on osteogenic differentiation.