Construção de biossensor contendo peroxidase para determinação de ácido cafeico em vinho branco

Abstract

Neste trabalho extraiu-se a enzima peroxidase da vagem (Phaseolus vulgaris) em tampão fosfato 0,1 mol L-1 (pH 7) que foi imobilizada em suporte de quitina obtida de gládios de lula e empregada na construção de biossensores. A quitina foi reticulada usando o glutaraldeído que atua sobre os grupos aminos e a epicloridrina agindo sobre os grupos acetamido. Os biossensores de pasta de carbono foram construídos a partir de 10:75:15% m/m de quitina contendo 1200 unidades/ mL de enzima, pó de grafite e nujol, respectivamente. A maior resposta analítica foi obtida em pH 7, freqüência de 80 Hz, amplitude de 50 mV e velocidade de varredura de 50 mV s-1 usando a voltametria de onda quadrada. A partir dos melhores parâmetros construiu-se a curva analítica para ácido cafeico que apresentou uma linearidade de 2,0x10-5 a 2,0x10-4 mol L-1 (r = 0,9990) e limite de detecção de 2,0x10-6 mol L-1. Estudo de repetibilidade e reprodutibilidade usando uma solução 1,2x10-4 mol L-1 de ácido cafeico e 2,0x10-3 mol L-1 de peróxido de hidrogênio em solução tampão fosfato 0,1 mol L-1 (pH 7) foi de 4 e 13 %, respectivamente. O estudo de adição e recuperação de ácido cafeico em amostras de vinho branco foi de 90,7 a 105,0 %.