Protocolo preliminar da cultura de fibroblastos de gengiva humana: avaliação da viabilidade celular e dos possíveis danos causados ao DNA

Abstract

Os objetivos foram estabelecer um protocolo preliminar de cultivo primário de fibroblastos gengivais humanos e conseqüentemente, estabelecer uma linhagem celular; avaliar a viabilidade celular e os danos que os procedimentos precedentes poderiam causar na molécula de DNA. Uma biópsia de 20mm2 de mucosa ceratinizada foi fragmentada em 15 partes menores e divididas em 5 garrafas de cultura. A proliferação celular foi verificada através de microscópio invertido. Após subconfluência 70%, as células foram tripsinizadas. Foram usadas as células da 6a passagem. A viabilidade foi determinada através do teste de exclusão do azul de Trypan. Os possíveis danos nos DNA foram avaliados pelo Ensaio do Cometa. Uma das garrafas foi tratada com peróxido de hidrogênio. A viabilidade dos grupos-teste foi maior que 90%. Os DNAs dos grupos-teste não apresentaram danos significativos (p<0,01). Foi possível, estabelecer uma linhagem de fibroblastos viáveis e sem alterações significantes no seu DNA. Os achados permitem o uso destas células em futuras pesquisas.