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Abstract:
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W. ebracteata Cogn. (taiuiá) e L. operculata (L.) Cogn. (buchinha-do-norte) são espécies vegetais da família Cucurbitaceae, utilizadas como medicinais, sendo que as raízes de W. ebracteata apresentam di-hidrocucurbitacina B (DHCB) como constituinte majoritário, e os frutos de L. operculata, cucurbitacina B (CB). O objetivo deste trabalho é desenvolver métodos para doseamento de DHCB e de CB nestas espécies, empregando CLAE e espectrofotometria de absorção no UV. DHCB e CB foram isoladas, e tiveram sua pureza determinada por CLAE. Na otimização dos parâmetros da análise por CLAE (coluna ODS, 5 mm, 150 X 4,6 mm) foram testados diferentes eluentes, fluxos e comprimentos de onda, além de eluição por gradiente e isocrática. Em relação ao modo de preparo da amostra foram testadas extrações a partir de raízes de W. ebracteata, por maceração com etanol e posterior partição com éter de petróleo (EP) e diclorometano (DC), e extrações diretas por maceração com EP e DC. Foi selecionada a extração por maceração com EP, seguida de extração com DC em refluxo, sendo o extrato diclorometânico seco ressuspenso em acetonitrila e filtrado por membrana (0,45 mm). Para a análise por espectrofotometria no UV foi necessária uma diluição 1:10 a partir do extrato utilizado na análise por CLAE. Os parâmetros selecionados para o método por CLAE foram: eluente CH3CN:H2O 40:60; fluxo de 1,2 mL/min. Tanto por CLAE quanto por espectrofotometria de absorção no UV a detecção foi realizada em 210 e 230 nm. Foi realizada uma curva de calibração, obtendo-se fórmulas para o cálculo da concentração de DHCB e CB. Foram realizados estudos preliminares de validação determinando-se a linearidade, a exatidão, a precisão intra-ensaio e intermediária, além dos limites de detecção e quantificação. A análise por CLAE se mostrou reprodutível, a precisão intermediária encontrada (em média 8%) foi considerada satisfatória por tratar-se de análise de plantas. A recuperação (em média de 77%), demonstrou o grau de exatidão do método. A detecção em 230 nm foi mais apropriada por apresentar menor interferência de outras substâncias presentes no extrato. Por outro lado tanto a precisão quanto a exatidão obtida na análise por espectrofotometria no UV foram insatisfatórias, portanto, este método precisa ser reformulado. O método desenvolvido foi aplicado na análise de amostras comerciais de taiuiá e de buchinha-do-norte. Os resultados deste ensaio mostraram uma grande variabilidade quali e quantitativa nas amostras de taiuiá, enquanto que as amostras de buchinha diferiram apenas quanto ao teor de cucurbitacinas. Frações diclorometânicas de W. ebracteata e L. operculata empregadas em ensaios farmacológicos foram caracterizadas quali e quantitativamente. |
