Caracterização do perfil diferencial de proteínas expressas em brânquias do camarão branco Litopenaeus vannamei (BOONE, 1931) infectado versus não infectado com o vírus da mancha branca (WSSV)

Abstract

A carcinicultura tem crescido muito nos últimos anos devido à grande demanda do mercado consumidor. No entanto, o surgimento de enfermidades representa uma ameaça concreta para a manutenção dos níveis de produção do setor. Entre as enfermidades virais, podemos citar aquela causada pelo vírus da síndrome da mancha branca como uma das principais responsáveis por afetar o cultivo de camarão marinho em nível mundial. Este trabalho teve como objetivo caracterizar o perfil diferencial de proteínas expressas em brânquias do camarão branco, Litopenaeus vannamei, infectado com o vírus da síndrome da mancha branca (White spot syndrome vírus, WSSV). Espécimes de L. vannamei sobreviventes foram coletados em cultivos na região norte e sul do estado de Santa Catarina, de 2008 a 2009, entre Maio e Setembro, período no qual são registradas temperaturas mais baixas na região. A segunda parte do estudo foi realizada com camarões L. vannamei livres de patógeno específico (specific pathogen free, SPF), os quais foram divididos em dois grupos, sendo um deles inoculado (inoculação intramuscular) com o WSSV. Os camarões (grupo inoculado e grupo controle) foram mantidos em laboratório e monitorados continuamente por um período de 72 horas, após a inoculação. Foi realizada a coleta de brânquias e pleópodes. A confirmação da presença do WSSV nos camarões coletados no campo e naqueles inoculados em laboratório foi realizada através de PCR nested. Posteriormente, a análise proteômica foi realizada através de eletroforese bidimensional (2-DE), seguida de coloração dos géis por nitrato de prata e/ou CBB (G-250). O perfil de proteínas, revelado com base na análise densitométrica dos géis, foi, então, comparado entre os camarões positivos para o WSSV e aqueles sem a presença do vírus. Dentre os spots (proteínas) presentes nos perfis eletroforéticos determinados para cada um dos grupos, um total de 56 foi associado à expressão diferencial entre os camarões infectados e camarões não infectados pelo WSSV. Oito spots foram observados nos animais coletados no campo, enquanto 48 deles foram observados nos animais inoculados em laboratório. A identificação das proteínas expressas diferencialmente foi realizada através de espectrometria de massa MALDI/TOF. As proteínas identificadas podem ser agrupadas de acordo com as suas funções celulares, revelando proteínas envolvidas nas respostas de defesa do hospedeiro, no metabolismo energético, na resposta ao estresse e na apoptose celular. Estas proteínas podem ser consideradas como biomarcadores moleculares potenciais, cuja identificação pode contribuir para o melhor entendimento dos mecanismos de defesa, susceptibilidade e tolerância ao WSSV, bem como, para o delineamento de novas estratégias para minimizar o impacto e combater a enfermidade.