Análise da autofagia em células GBM-1 expostas ao CuSO4

Abstract

O cobre é um micronutriente essencial para o funcionamento de células saudáveis; no entanto, em níveis elevados, pode ser citotóxico. Sabe-se que as células tumorais possuem maior necessidade fisiológica de cobre, apresentando uma vulnerabilidade metabólica que possibilita a pesquisa sobre os efeitos de alterações nos níveis deste metal nestas células, visando o uso de compostos contendo cobre como terapia antitumoral. Dessa forma, o presente trabalho buscou avaliar parâmetros relacionados à autofagia em células de linhagem de glioblastoma humano (GBM-1) expostas ao excesso de cobre (600 µM de CuSO4) por 24 horas. Para isso, foi utilizada a técnica de imunofluorescência, detectando o conteúdo das proteínas LC3B, p62, ATG16L e PINK1. As amostras foram analisadas por microscopia de fluorescência, com a densidade óptica mensurada através do software ImageJ. Foram analisadas de 10 a 15 fotografias por grupo experimental, de três experimentos independentes. Os resultados demonstraram que a formação de autofagossomos foi mais frequente em células expostas ao CuSO4, verificado pelo aumento da marcação para a proteína ATG16L. Além disso, o controle do reconhecimento de proteínas ubiquitinadas, e a autofagia seletiva de mitocôndrias (mitofagia), também apresentaram um aumento no grupo exposto ao CuSO4, pelas marcações de p62 e PINK1, respectivamente. Contudo, não se observou diferença na imunomarcação para a proteína LC3B entre o grupo exposto ao excesso de cobre e os controles. Desta forma, conclui-se através da presente pesquisa que o excesso de cobre atua ativando os processos de autofagia e mitofagia em células da linhagem de glioblastoma GBM-1. Mais pesquisas são necessárias para verificar se a ativação destes processos seria uma resposta à citotoxicidade do cobre para garantir a sobrevivência tumoral, ou se o excesso do metal leva a uma autofagia excessiva que desencadearia a morte celular.