| dc.description.abstract |
A Doença de Parkinson (DP) é uma doença neurodegenerativa causada pela morte de neurônios dopaminérgicos que leva, principalmente, a alterações motoras. Estudos têm mostrado que o microRNA-124 (miR-124) é capaz de modular a neuroinflamação e promover efeitos neuroprotetores; contudo, sua aplicação clínica é limitada pela rápida degradação em fluidos biológicos e pela baixa capacidade de entrada celular. Nesse contexto, foram desenvolvidas nanopartículas lipídicas (NPLs) destinadas à administração intranasal do miR-124, com o objetivo de proteger o ácido nucleico e favorecer seu transporte direto até o SNC. As NPLs foram preparadas pela técnica de diluição em etanol. Esta técnica se baseia na adição de uma solução etanólica dos lipídios em uma solução tampão acetato pH 4,0 contendo o miR-124. As NPLs são formadas espontaneamente e, após, dialisadas contra tampão fosfato pH 7,4. As NPLs foram constituídas dos lipídios DODMA e/ou DOTAP (NPLD e NPLD+D, respectivamente) como lipídio catiônico, DSPC como lipídio estruturante, DSPE-PEG2000 como lipídio peguilado, e colesterol, na razão molar de 50:10:1,5:38,5. O miR-124 foi adicionado às formulações na razão N/P de 10:1. Quando necessário, colesterol-NBD foi adicionado para obtenção de NPLs fluorescentes. As NPLs foram caracterizadas quanto ao tamanho, PDI e potencial zeta em Zetasizer Nano ZS. A eficiência de encapsulação (EE) foi avaliada usando o reagente RiboGreen. Para avaliação do potencial de administração nasal, estudos de estabilidade em fluido nasal simulado (SNES), e de mucoadesão e mucopenetração foram conduzidos. Igualmente, a capacidade das NPLs em permear através da mucosa nasal foi avaliada em modelo de células de Franz, empregando mucosa nasal suína como modelo de membrana. Para isto, cortes da mucosa nasal foram obtidos após aplicação das NPLs e visualizados por microscopia confocal. O software ImageJ foi empregado para quantificação da fluorescência. Os resultados foram avaliados estatisticamente pela ANOVA. Ambas as formulações (NPLD e NPLD+D) apresentaram tamanho nanométrico com PDI < 0,3 e potencial zeta próximo da neutralidade (~3 mV). Valores de EE do miR-124 elevados (>90%) foram obtidos. Em SNES, as NPLs mantiveram-se estáveis (diâmetro < 200 nm). A incubação com uma dispersão de mucina (0,1–1,0 mg/mL) não provocou alterações significativas no tamanho, PDI ou potencial zeta das NPLD+D, indicando baixa capacidade de mucoadesão. Por outro lado, as NPLs mostraram ser capazes de atravessar a camada de muco, evidenciando suas propriedades mucopenetrantes. Os estudos de permeação evidenciaram a significativa capacidade das NPLs em atravessar a mucosa e alcançar a camada basal do epitélio olfativo, em contraposição à aplicação do marcador fluorescente livre, que permaneceu retido na região apical (p < 0,05). No conjunto, as NPLs mostraram ser sistemas promissores para a administração nasal do miR-124, na busca de uma estratégia inovadora para o tratamento da Doença de Parkinson. |
pt_BR |
