Caracterização do perfil de agregação e estabilidade de bacteriófagos após aplicação de métodos de purificação e recuperação viral

Abstract

Bacteriófagos são promissores agentes bactericidas, amplamente estudados por seu potencial no controle de infecções e em diversas outras aplicações. Contudo, a estabilidade de armazenamento dos bacteriófagos e os efeitos dos métodos de purificação utilizados nesse processo ainda são pouco compreendidos, o que pode comprometer a viabilidade dos bacteriófagos armazenados por períodos prolongados. Um dos principais fatores associados à perda de viabilidade é a agregação das partículas virais, sendo proposto o uso de surfactantes, como o Tween 20, para aumentar a estabilidade e viabilidade dos bacteriófagos. Com o objetivo de investigar a relação entre a agregação viral e a perda de infecciosidade, foram realizadas purificações dos bacteriófagos MS2 e Phix174 por clarificação com clorofórmio e concentração por PEG, ambos com e sem a adição de Tween 20, e purificação com Triton X-100, durante um período de 55 dias. Os resultados indicaram que tanto a infecciosidade quanto o perfil de agregação dos bacteriófagos variam conforme o método de purificação utilizado. No entanto, não foi observada correlação entre a agregação viral e a viabilidade infecciosa. Além disso, os bacteriófagos MS2 e Phix174 apresentaram respostas distintas aos mesmos tratamentos, sugerindo que não existe um método universalmente eficaz para todos os tipos de bacteriófagos. Assim, o presente estudo concluiu que a agregação viral não está diretamente relacionada à infecciosidade dos bacteriófagos e enfatiza a necessidade de desenvolver protocolos específicos para cada tipo de vírus, a fim de garantir sua estabilidade após longos períodos de armazenamento.

Abstract: Bacteriophages are promising bactericidal agents widely evaluated for their potential in infection control and various other applications. However, the storage stability of bacteriophages and the effects of purification methods on this process are not well understood, which may compromise the viability of bacteriophages stored for extended periods. One of the main factors associated with viability loss is the aggregation of viral particles, with the use of surfactants such as Tween 20 proposed to enhance the stability and viability of bacteriophages. To investigate the relationship between viral aggregation and loss of infectivity, purification of MS2 and Phix174 bacteriophages were performed using clarification by chloroform and concentration by PEG, both with and without the addition of Tween 20, and purification with Triton X100, over a 55-day period. The results showed that both infectivity and aggregation profiles of the bacteriophages varied depending on the purification method used. However, no correlation was observed between viral aggregation and infectivity. Furthermore, MS2 and Phix174 exhibited distinct responses to the same treatments, suggesting that no universal method is effective for all types of bacteriophages. Thus, this study concluded that viral aggregation is not directly related to bacteriophage infectivity and emphasizes the need for specific protocols for each type of virus to ensure stability after long-term storage.