Avaliação do compartimento de linfócitos B, em sangue periférico de pacientes não vacinados infectados pelo SARS-CoV-2

Abstract

A COVID-19, doença causada pelo coronavírus SARS-CoV-2, se espalhou globalmente após o primeiro caso ser reportado em Wuhan, China, em dezembro de 2019. Esta doença varia em gravidade podendo levar à morte. Estudos indicam que a resposta imunológica desempenha um papel fundamental na evolução da doença. Neste contexto, o presente estudo teve como objetivo analisar o compartimento de células B, a presença de anticorpos contra o SARS-CoV- 2, bem como a presença de RNA viral no sangue periférico de pacientes com COVID-19, em diferentes estágios clínicos da doença. Este estudo, observacional longitudinal, incluiu 133 pacientes com COVID-19 não vacinados contra o SARS-CoV-2. Os componentes celulares do compartimento de células B foram avaliados por citometria de fluxo e a presença de anticorpos específicos foi analisada através do ensaio imunoenzimático indireto. Já a presença de RNA viral no plasma dos pacientes foi verificada através da técnica de RT-qPCR, utilizando como alvo os genes ORF1a/b e N. Os resultados obtidos demostraram que as células B de memória que não trocaram de classe (NS-MBC) e as células B de memória que trocaram de classe (CS- MBC) apresentaram contagem relativa reduzida em pacientes com doença moderada. Além disso, os plasmablastos e as células B de memória duplo-negativas (DN) apresentaram contagem aumentada em pacientes com condições clínicas moderadas a críticas. O aumento na contagem de células B DN também mostrou relação com um pior desfecho da doença (morte). Por outro lado, observamos que um aumento no número de CS-MBC indicava maiores chances de sobrevivência. Além disso, a pesquisa por anticorpos IgM, IgG e neutralizantes contra SARS-CoV-2 demonstrou uma correlação positiva com a gravidade da doença. Com relação a presença de RNA viral no plasma, os pacientes com quadro clínico crítico apresentavam um resultado positivo com maior frequência. Sendo assim, este estudo mostrou que a presença de anticorpos específicos contra o SARS-CoV-2 e a presença de RNA viral no plasma está relacionada com o desenvolvimento de quadros clínicos mais graves da COVID-19. Este estudo mostrou também que alterações nas contagens de subpopulações de linfócitos B tiveram relação com o desenvolvimento de sintomas mais graves da doença. Com os linfócitos B DN apresentando relação com um pior desfecho (morte) e as CS-MBC apresentando relação com um desfecho favorável (sobrevivência).

Abstract: COVID-19, the disease caused by the coronavirus SARS-CoV-2, spread globally after the first case was reported in Wuhan, China, in December 2019. This disease varies in severity and can lead to death. Studies indicate that the immune response plays a fundamental role in the evolution of the disease. In this context, the present study aimed to analyze the B cell compartment, the presence of antibodies against SARS-CoV-2, as well as the presence of viral RNA in the peripheral blood of patients with COVID-19, at different clinical stages of the disease. illness. This longitudinal observational study included 133 patients with COVID-19 who were not vaccinated against SARS-CoV-2. The cellular components of the B cell compartment were evaluated by flow cytometry and the presence of specific antibodies was analyzed using indirect enzyme immunoassay. The presence of viral RNA in the patients' plasma was verified using the RT-qPCR technique, using the ORF1a/b and N genes as targets. The results obtained demonstrated that memory B cells that did not change class (NS-MBC) and class-switched memory B cells (CS-MBC) showed reduced relative counts in patients with moderate disease. Furthermore, plasmablasts and double-negative (DN) memory B cells showed increased counts in patients with moderate to critical clinical conditions. The increase in DN B cell count also showed a relationship with a worse outcome of the disease (death). On the other hand, we observed that an increase in the number of CS-MBC indicated greater chances of survival. Furthermore, the search for IgM, IgG and neutralizing antibodies against SARS-CoV-2 demonstrated a positive correlation with the severity of the disease. Regarding the presence of viral RNA in plasma, patients with a critical clinical condition presented a positive result more frequently. Therefore, this study showed that the presence of specific antibodies against SARS-CoV-2 and the presence of viral RNA in plasma are related to the development of more severe clinical conditions of COVID-19. This study also showed that changes in the counts of B lymphocyte subpopulations were related to the development of more severe symptoms of the disease. With DN B lymphocytes showing a relationship with a worse outcome (death) and CS-MBC showing a relationship with a favorable outcome (survival).