Atividade antiagregante in vitro de análogos de dihidropiridinas

Abstract

As doenças cardiovasculares são responsáveis por grande parte das mortes no mundo e os medicamentos antitrombóticos são os mais utilizados no seu tratamento e prevenção. Apesar de esses medicamentos terem comprovada efetividade, ainda apresentam limitações de uso, o que torna necessária a busca por novos agentes antitrombóticos. Portanto, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de quinze dihidropiridinas (DHPs) sobre a agregação plaquetária e a coagulação sanguínea. Os testes in sílico de biodisponibilidade oral e toxicidade realizados pelos programas SwissADME e Osiris® Property Explorer demonstraram que todas as DHPs apresentam promissora biodisponibilidade oral e baixa toxicidade teórica. O efeito antiagregante foi avaliado por agregometria, utilizando como agonistas difosfato de adenosina (ADP) e epinefrina, os compostos L-11, L-12, L-13, L-14, L-15, L-16, L-17, L-20, L-24, L-26, L-27, L-28 e L-29 inibiram significativamente a agregação induzida por pelo menos um dos agonistas. As DHPs N-feniladas (L-18 até L-29) apresentaram atividade antiagregante pouco promissora na triagem e, por isso, não foi dada continuidade nas investigações com esses compostos. Nenhuma das DHPs não N-feniladas (L-11 até L-17) apresentou promissora atividade anticoagulante segundo os testes de tempo de protrombina (TP) e de tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPa). Segundo o teste de viabilidade plaquetária, realizado pelo método de exclusão por azul de Trypan, três compostos não diminuíram significativamente a viabilidade das plaquetas, foram os composto L-11, L-14 e L-15 que apresentaram viabilidade de 95,1 ± 0,6%, 94,4 ± 0,2% e 94,2 ± 1,6%, respectivamente. Considerando os resultados dos testes de agregação e viabilidade plaquetária, o composto L-11 foi selecionado para dar continuidade aos estudos. As CI50 do composto L-11 utilizando-se ácido araquidônico, colágeno e epinefrina como agonistas foram de 113,4 ± 7,44 µM, 399,4 ± 16,41 µM e 334,1 ± 15,74 µM, respectivamente. O composto L-11 inibiu a primeira e a segunda onda de agregação quando o ácido araquidônico foi empregado como agonista, e inibiu apenas parcialmente a segunda onda quando as plaquetas foram estimuladas com colágeno e epinefrina. Adicionalmente, L-11 diminuiu a expressão de P-selectina em 76,47% quando as plaquetas foram estimuladas com ácido araquidônico. A compilação dos resultados sugere que o possível mecanismo de ação do composto L-11 se dá pela inibição da via do ácido araquidônico.

Abstract: Cardiovascular diseases are responsible for most deaths in the world and antithrombotic drugs are the most used in their treatment and prevention. Although these drugs have proven effectiveness, they still have limitations in their use, which makes it necessary to search for new antithrombotic agents. Therefore, the objective of this study was to evaluate the effect of fifteen dihydropyridines (DHPs) on platelet aggregation and blood clotting. In silico tests of oral bioavailability and toxicity performed by the SwissADME and Osiris® Property Explorer programs demonstrated that all DHPs show promising oral bioavailability and low theoretical toxicity. The antiplatelet effect was evaluated by aggregometry, using adenosine diphosphate (ADP) and epinephrine as agonists, and the compounds L-11, L-12, L-13, L-14, L-15, L-16, L-17, L-20, L-24, L-26, L-27, L-28 e L-29 significantly inhibited the aggregation induced by at least one of the agonists. N-phenylated DHPs (L-18 to L-29) showed unpromising antiplatelet activity in screening and, therefore, investigations with these compounds were not continued. None of the non-N-phenylated DHPs (L-11 to L-17) showed promising anticoagulant activity according to the prothrombin time (PT) and activated partial thromboplastin time (APTT) tests. According to the platelet viability test, carried out by the Trypan blue exclusion method, three compounds did not significantly decrease platelet viability. 95,1 ± 0,6%, 94.4 ± 0.2% and 94.2 ± 1.6%, respectively. Considering the results of the platelet aggregation and viability tests, the compound L-11 was selected to continue the studies. The IC50 of compound L-11 using arachidonic acid, collagen and epinephrine as agonists were 113.4 ± 7.44 µM, 399.4 ± 16.41 µM and 334.1 ± 15.74 µM, respectively. Compound L-11 inhibited the first and second waves of aggregation when arachidonic acid was used as an agonist, and only partially inhibited the second wave when platelets were stimulated with collagen and epinephrine. Additionally, L-11 decreased P-selectin expression by 76.47% when platelets were stimulated with arachidonic acid. The compilation of the results suggests that the possible mechanism of action of the compound L-11 is due to the inhibition of the arachidonic acid pathway.