Adesão in vitro de bactérias probióticas como característica preditora de colonização intestinal em tilápia-do-nilo

Abstract

RESUMO Objetivou-se no presente estudo avaliar a relação entre adesão in vitro e a capacidade de colonização in vivo do produto probiótico comercial, contendo as bactérias Bacillus subitilis e Bacillus licheniformis, ao muco intestinal de tilápia-do-nilo-, bem como avaliar o desempenho zootécnico dos animais ao fim do período de suplementação. O ensaio in vitro foi realizado utilizando o muco intestinal retirado de juvenis de tilápia-do-nilo saudáveis, cultivado overnight em uma microplaca de 96 poços de fundo chato e posteriormente incubado durante 1h a 30ºC com o produto probiótico em diferentes concentrações de inóculo, as amostras foram diluídas serialmente em fator 1:10 e as diluições de 10-2 a 10-8 foram plaqueadas em meio de cultura. Para o ensaio in vivo foram utilizados 60 juvenis de tilápia-do-nilo, com peso e comprimento médio inicial de 9.81 ± 2.22 g e 8.33 ± 0.74 cm respectivamente, alojados em 6 unidades experimentais com volume útil de 70 litros cada, separados em doi grupos, um controle e outro suplementado. Os animais foram suplementados com o produto probiótico aspergido na ração na proporção de 100 mL Kg-1de ração e após o período experimental de 15 dias foi feita a analise microbiológiaca do trato intestinal para verificar o grau de colonização das bactérias. As duas bactérias (B. subitilis e B. licheniformis,) pertencentes ao produto probiótico aderiram de forma expressiva ao muco intestinal no ensaio in vitro a partir do inóculo de concentração 1x105 UFC mL-1. Contudo, no ensaio in vivo não houve diferença significativa nos parâmetros de desempenho zootécnico e na quantidade de bactérias heterotróficas totais entre os grupos. Métodos moleculares de identificação de bactérias devem ser aplicados para verificar os grupos de bactérias presentes na microbiota intestinal, e a partir disso mostrar as alterações microbiológicas no trato intestinal e a colonização específica de cada cepa probiótica.

The objective of the present study was to evaluate the relationship between in vitro adhesion and the in vivo colonization capacity of a commercial probiotic product, containing Bacillus subitilis e Bacillus licheniformis bacteria, to the intestinal mucosa of Nile tilapia, as well as to evaluate the zootechnical performance of the animals at the end of the supplementation period. The in vitro assay was performed using the intestinal mucus removed from healthy Nile tilapia juveniles, cultured overnight in a flat bottom 96-well microplate and subsequently incubated for 1 h at 30 ° C with the probiotic product at different concentrations of inoculum, the samples were serially diluted to factor 1:10 and the dilutions of 10-2 to 10-8 were plated in culture medium. For the in vivo test, 60 Nile tilapia juveniles with initial weight and average length of 9.81 ± 2.22 g and 8.33 ± 0.74 cm were used, housed in 6 experimental units with a useful volume of 70L each. The animals were supplemented with the probiotic product sprinkled in the feed in the proportion of 100 mL Kg-1 of feed,and after the experimental period of 15 days the microbiology of the intestinal tract was done to verify the degree of colonization of the bacteria. The two bacteria (B. subitilis and B. licheniformis), presents in the probiotic product, adhered expressively to the intestinal mucus in the in vitro assay from the inoculum of concentration 1x105 CFU mL-1. However, in the in vivo assay, there was no significant difference in the evaluation of the zootechnical performance and in the amount of total heterotrophic bacteria between the control and supplemented groups. Molecular methods of bacterial identification should be applied to verify the groups of bacteria present in the intestinal microbiota, and from this show the microbiological changes in the intestinal tract and the specific colonization of each probiotic strain.