Evidência para o envolvimento do receptor FPR2/ALX periférico no efeito anti-hiperalgésico da eletroacupuntura sobre parâmetros inflamatórios em camundongos com inflamação periférica

Abstract

A acupuntura é uma prática terapêutica comumente utilizada e recomendada para o manejo da dor e da inflamação. O conhecimento acerca do mecanismo analgésico da eletroacupuntura (EA) tem avançado pela demonstração do envolvimento do receptor 2 para peptídeos formilados (FPR2/ALX) na ação anti-hiperalgésica da EA. Os efeitos da EA na dor e na inflamação são semelhantes aos efeitos desencadeados pela ativação do receptor FPR2/ALX mediada por substâncias pró-resolutivas. Contudo o papel desse receptor no efeito anti-hiperalgésico da EA sobre parâmetros inflamatórios e oxidativos não tem sido explorado. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi avaliar o envolvimento do receptor FPR2/ALX periférico na anti-hiperalgesia induzida pela EA de baixa frequência sobre parâmetros inflamatórios em um modelo animal de inflamação periférica persistente. Para tanto, camundongos machos Swiss foram submetidos à injeção intraplantar (i.pl.) com o adjuvante completo de Freund (CFA). Do primeiro ao quarto dia após a indução do modelo, os animais receberam injeção i.pl. do antagonista seletivo para o receptor FPR2/ALX (WRW4) ou salina quinze minutos antes do tratamento com EA. Os animais foram tratados com EA (frequência 2 e 10 Hz, nos acupontos SP6 e ST36, por 20 minutos) uma vez ao dia, por quatro dias. A hiperalgesia mecânica foi avaliada pelo teste de von Frey. No quarto dia, após o tratamento com a EA, os animais foram eutanasiados e as estruturas de interesse foram coletadas para a realização das seguintes análises bioquímicas: avaliação da concentração de citocinas inflamatórias (TNF, IL-6, IL-10 e IL-4), da atividade da enzima mieloperoxidase (MPO), de parâmetros de dano oxidativo (peroxidação lipídica, proteínas carboniladas, relação da concentração de nitrito/nitrato) e de defesa antioxidante (atividade das enzimas catalase (CAT) e superóxido dismutase (SOD)). Os resultados demonstraram que o pré-tratamento i.pl. com o antagonista para o receptor FPR2/ALX preveniu o efeito anti-hiperalgésico induzido pela EA. Além disso, o tratamento com a EA aumentou a concentração de IL-10 e a atividade da enzima antioxidante CAT na pata inflamada dos animais, ações que foram prevenidas pelo antagonista WRW4. As concentrações de TNF, IL-6 e IL-4, a atividade das enzimas MPO e SOD e os parâmetros de dano oxidativo não foram alterados pelo tratamento com a EA. Diante desses achados, pode-se concluir que o tratamento com a EA reduziu a hiperalgesia mecânica, aumentou a concentração de IL-10 e aumentou a atividade da enzima CAT, ações que podem ser dependentes, pelo menos em parte, da ativação do receptor FPR2/ALX periférico.

Abstract: Acupuncture is a therapeutic practice commonly used and recommended for pain relief and inflammation. Our knowledge of the analgesic mechanism of electroacupuncture (EA) has advanced. We have previously demonstrated the involvement of formyl peptide receptor type 2 (FPR2/ALX) in the antihyperalgesic effect of EA. The effects of EA on pain and inflammation are similar to those triggered by the activation of FPR2/ALX by pro-resolving mediators. However, the role of this receptor in the antihyperalgesic effect of EA on inflammatory parameters and oxidative stress has not been investigated. Thus the aim of this study was to assess the role of peripheral FPR2/ALX in the antihyperalgesic effect induced by low frequency EA in an animal model of persistent peripheral inflammation. Male Swiss mice underwent intraplantar (i.pl.) injection with complete Freund's adjuvant (CFA). Animals received i.pl. WRW4 (FPR2/ALX antagonist) or saline from the first to the fourth day after CFA injection, fifteen minutes before EA treatment (frequency 2 and 10 Hz, acupoints SP6 and ST36, for 20 minutes, once a day). Mechanical hyperalgesia was assessed with von Frey filaments. On the fourth day after EA, animals were euthanized, and right hind paw tissue samples were collected for biochemical analysis. Levels of inflammatory cytokines (TNF, IL-6, IL-10 and IL-4), myeloperoxidase (MPO) activity, oxidative stress markers (lipid peroxidation, carbonylated proteins, nitrite/nitrate ratio) and antioxidant enzymes activity (catalase (CAT) and superoxide dismutase (SOD)) were evaluated. We found that i.pl. injection of the FPR2/ALX antagonist prevented the antihyperalgesic effect induced by EA. Furthermore, animals treated with EA showed increased levels of IL-10 and higher CAT activity in the inflamed paw, and these effects were prevented by the antagonist WRW4. Both MPO and SOD activity, levels of TNF, IL-6 and IL-4, and oxidative stress markers remained unchanged. In conclusion, EA treatment reduced mechanical hyperalgesia and increased IL-10 levels and CAT activity, effects that may be dependent, at least in part, on the activation of peripheral FPR2/ALX.